| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-23页 |
| ·β-甘露聚糖酶的研究进展 | 第13-21页 |
| ·酶的来源及诱导 | 第13-15页 |
| ·酶来源菌的筛选 | 第15页 |
| ·酶的作用方式及水解产物 | 第15-16页 |
| ·酶的基本性质 | 第16-17页 |
| ·酶的分离纯化和活力测定 | 第17-18页 |
| ·酶的分类 | 第18-19页 |
| ·酶的分子生物学 | 第19-20页 |
| ·酶的应用 | 第20-21页 |
| ·研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 芽孢杆菌β-甘露聚糖酶新基因的筛选 | 第23-33页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·引物合成 | 第23页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第23页 |
| ·溶液 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-27页 |
| ·芽孢杆菌(Bacillus)β-甘露聚糖酶的平板筛选 | 第24页 |
| ·芽孢杆菌(Bacillus)的诱导产酶 | 第24页 |
| ·β-甘露聚糖酶的活性测定 | 第24-25页 |
| ·模板DNA的提取 | 第25页 |
| ·β-甘露聚糖酶基因部分序列的克隆 | 第25页 |
| ·DNA片段的回收和连接 | 第25-26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·电转化 | 第26-27页 |
| ·重组子筛选 | 第27页 |
| ·DAN测序 | 第27页 |
| ·芽孢杆菌β-甘露聚糖酶基因片段的相似性分析 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-32页 |
| ·产β-甘露聚糖酶的芽孢杆菌菌株的筛选 | 第28-30页 |
| ·β-甘露聚糖酶部分编码基因序列的克隆 | 第30-31页 |
| ·测得芽孢杆菌β-甘露聚糖酶编码基因序列相似性分析 | 第31-32页 |
| 本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 环形芽孢杆菌B48β-甘露聚糖酶基因的克隆，表达和酶的性质分析 | 第33-57页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·引物合成 | 第33页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·培养基配制 | 第33-34页 |
| ·有关试剂和溶液配制 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-44页 |
| ·基因克隆 | 第34-36页 |
| ·原核表达载体pET-22b-manB48E和pET-22b-manB48E-H(His-Tag~+)的构建 | 第36-38页 |
| ·pET-22b-manB48E和pET-22b-man48E-H在大肠杆菌中的表达及检测 | 第38-39页 |
| ·真核表达载体pPIC9-manB48P的构建 | 第39-40页 |
| ·pPIC9-manB48P在毕赤酵母中的表达及检测 | 第40-42页 |
| ·大肠杆菌表达的β-甘露聚糖酶MANB48E-H纯化 | 第42-43页 |
| ·β-甘露聚糖酶MANB48E-H的酶学性质分析 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-56页 |
| ·基因克隆 | 第44-47页 |
| ·基因表达 | 第47-50页 |
| ·β-甘露聚糖酶MANB48E-H的纯化 | 第50-51页 |
| ·β-甘露聚糖酶MANB48-H的性质分析 | 第51-56页 |
| 本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 环形芽孢杆菌B49β-甘露聚糖酶基因的克隆，表达和酶的性质分析 | 第57-80页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·菌株与质粒 | 第57页 |
| ·引物合成 | 第57页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·培养基配制 | 第57页 |
| ·有关试剂和溶液配制 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-63页 |
| ·基因克隆 | 第58-60页 |
| ·原核表达载体pET-22b-manB49E和pET-22b-manB49E-H(His-Tag~+)的构建 | 第60-61页 |
| ·pET-22b-manB49E和pET-22b-man49E-H在大肠杆菌中的表达及检测 | 第61页 |
| ·真核表达载体pPIC9-manB49P的构建 | 第61-62页 |
| ·真核表达载体pPIC9-manB49P的表达及检测 | 第62页 |
| ·大肠杆菌表达的β-甘露聚糖酶MANB49E-H纯化 | 第62-63页 |
| ·β-甘露聚糖酶MANB49E-H的酶学性质分析 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-79页 |
| ·基因克隆 | 第63-68页 |
| ·基因表达 | 第68-73页 |
| ·β-甘露聚糖酶MANB49E-H的纯化 | 第73-75页 |
| ·β-甘露聚糖酶MANB49E-H的性质分析 | 第75-79页 |
| 本章小结 | 第79-80页 |
| 第五章 枯草芽孢杆菌B36β-甘露聚糖酶基因的克隆，表达和酶的性质分析 | 第80-102页 |
| ·材料与方法 | 第80-81页 |
| ·菌株与质粒 | 第80页 |
| ·引物合成 | 第80页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第80页 |
| ·主要仪器 | 第80页 |
| ·培养基 | 第80页 |
| ·有关试剂和溶液配制 | 第80-81页 |
| ·实验方法 | 第81-84页 |
| ·基因克隆 | 第81页 |
| ·原核表达载体pET-22b-manB36E的构建 | 第81-82页 |
| ·pET-22b-manB36E在大肠杆菌中的表达及检测 | 第82页 |
| ·真核表达载体pPIC9-manB36P的构建 | 第82-83页 |
| ·pET-22b-manB36P在毕赤酵母中的表达及检测 | 第83页 |
| ·β-甘露聚糖酶MANB36的纯化 | 第83页 |
| ·β-甘露聚糖酶MANB36转PVDF膜 | 第83-84页 |
| ·重组β-甘露聚糖酶MANB36P的纯化 | 第84页 |
| ·β-甘露聚糖酶MANB36和MANB36P的酶学性质分析 | 第84页 |
| ·结果与分析 | 第84-101页 |
| ·基因克隆 | 第84-86页 |
| ·基因表达 | 第86-90页 |
| ·蛋白纯化 | 第90-92页 |
| ·β-甘露聚糖酶MANB36的性质分析 | 第92-97页 |
| ·重组的β-甘露聚糖酶MANB36P的性质分析 | 第97-101页 |
| 本章小结 | 第101-102页 |
| 第六章 讨论 | 第102-109页 |
| ·关于β-甘露聚糖酶新基因的快速筛选 | 第102页 |
| ·反向PCR(IPCR)技术的应用 | 第102-103页 |
| ·克隆的β-甘露聚糖酶基因比较 | 第103-104页 |
| ·从大肠杆菌中纯化表达的β-甘露聚糖酶 | 第104-105页 |
| ·MANB48E-H和MANB49E-H的酶学性质 | 第105-106页 |
| ·MANB36和MANB36P的酶学性质 | 第106-107页 |
| ·纯化的四个β-甘露聚糖酶性质比较 | 第107-109页 |
| 第七章 结论 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简历 | 第120页 |
