| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 前沿 | 第14-22页 |
| 1 腺相关病毒载体及其生产方式 | 第14-18页 |
| ·腺相关病毒简介 | 第14-15页 |
| ·腺相关病毒载体 | 第15页 |
| ·腺相关病毒载体在基因治疗中的应用 | 第15-16页 |
| ·腺相关病毒载体生产方式研究进展 | 第16-18页 |
| 2 西妥昔(Cetuximab)单抗及转录调控元件WPRE | 第18-20页 |
| ·EGFR 及西妥昔Cetuximab 单抗研究进展 | 第18-20页 |
| ·转录调控元件WPRE | 第20页 |
| 3 课题创新点、研究内容 | 第20-22页 |
| ·课题创新点 | 第20页 |
| ·课题研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 重组载体的构建及 DH10Bac 菌内转座重组 | 第22-49页 |
| 1 实验器材 | 第22-26页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·仪器和设备 | 第22-23页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第23-24页 |
| ·主要试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·所用引物 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-41页 |
| ·重组载体构建 | 第26-38页 |
| ·BAPⅧ载体的构建 | 第26-32页 |
| ·pABV359-Cetuximab 载体的构建 | 第32-34页 |
| ·pABV359-Cetuximab-WPRE 载体的构建 | 第34-37页 |
| ·质粒的大量制备 | 第37-38页 |
| ·重组载体在DH10Bac~(TM)中的转座重组及重组Bacmid 的提取 | 第38-39页 |
| ·重组载体DH10Bac~(TM)中转座重组 | 第38页 |
| ·重组Bacmid 的大量抽提及PCR 鉴定 | 第38-39页 |
| ·pABV359-Cetuximab、pABV359-Cetuximab-WPRE 中Cetuximab 表达测定 | 第39-41页 |
| ·HEK293 细胞培养 | 第39-40页 |
| ·pABV359-Cetuximab、pABV359-Cetuximab-WPRE 质粒转染 | 第40页 |
| ·ELISA 检测Cetuximab 表达量 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-47页 |
| ·AAV2cap8i 基因片段PCR 扩增结果 | 第41-42页 |
| ·重组BAPⅧ载体酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·pABV359-Cetuximab 载体构建相关电泳图 | 第43-44页 |
| ·pABV359-Cetuximab-WPRE 载体的构建 | 第44-46页 |
| ·重组Bacmid 的PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·pABV359-Cetuximab、pABV359-Cetuximab-WPRE 质粒Cetuximab 表达量 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 重组杆状病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第49-59页 |
| 1 实验器材 | 第49-50页 |
| ·材料与试剂 | 第49页 |
| ·仪器和设备 | 第49-50页 |
| ·荧光定量PCR 引物 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-54页 |
| ·Sf9 细胞的培养 | 第50页 |
| ·重组杆状病毒的包装 | 第50-51页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第51页 |
| ·重组杆状病毒DNA 的提取 | 第51-52页 |
| ·荧光定量PCR 测定重组杆状病毒的滴度 | 第52-54页 |
| ·Bac-AAV2RepiCap8i 的滴度测定 | 第52-53页 |
| ·Bac-Cetuximab 的滴度测定 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-57页 |
| ·重组杆状病毒的滴度测定 | 第54-56页 |
| ·Bac-AAV2RepiCap8i 的滴度测定 | 第54-55页 |
| ·Bac-Cetuximab 的滴度测定 | 第55-56页 |
| ·ELISA 检测Bac-Cetuximab 在Sf9 细胞及HEK293 细胞中的的表达情况 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 重组 AAV 的生产、纯化、滴度和活力测定 | 第59-68页 |
| 1 实验器材 | 第59-60页 |
| ·材料与试剂 | 第59页 |
| ·仪器和设备 | 第59-60页 |
| ·试剂的配制 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-62页 |
| ·二杆状病毒包装系统包装获得rAAV8-EGFP、rAAV8-Cetuximab | 第60-61页 |
| ·rAAV8-EGFP、rAAV8-Cetuximab 纯化及滴度测定 | 第61页 |
| ·rAAV8-EGFP、rAAV8-Cetuximab 的纯化 | 第61页 |
| ·rAAV8-EGFP、rAAV8-Cetuximab 滴度测定 | 第61页 |
| ·rAAV8-EGFP、rAAV8-Cetuximab 灭活情况及对HEK293 细胞感染力检测 | 第61-62页 |
| ·rAAV8-EGFP、rAAV8-Cetuximab 灭活情况检测 | 第61-62页 |
| ·rAAV8-EGFP 对HEK293 细胞感染力检测 | 第62页 |
| ·rAAV8-Cetuximab 在HEK293 细胞中Cetuximab 的表达测定 | 第62页 |
| ·rAAV8-Cetuximab 感染HEK293 细胞 | 第62页 |
| ·ELISA 方法检测抗体Cetuximab 的表达量 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-66页 |
| ·rAAV8-EGFP、rAAV8-Cetuximab 滴度测定 | 第62-64页 |
| ·rAAV8-EGFP、rAAV8-Cetuximab 灭活情况及活力检测 | 第64-65页 |
| ·rAAV8-EGFP、rAAV8-Cetuximab 灭活情况检测 | 第64-65页 |
| ·rAAV8-EGFP 病毒活力检测 | 第65页 |
| ·rAAV8-Cetuximab 在HEK293 细胞中Cetuximab 抗体表达检测 | 第65-66页 |
| 4. 讨论 | 第66-68页 |
| 总结 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 附录 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
