| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一部分 引言 | 第15-28页 |
| 第一章 基因治疗研究现状 | 第16-28页 |
| 1 基因治疗的概念及发展历程 | 第16页 |
| 2 基因传递系统 | 第16-19页 |
| ·非病毒传递系统 | 第16-17页 |
| ·病毒传递系统 | 第17-19页 |
| ·逆转录病毒系统 | 第17页 |
| ·单纯疱疹病毒系统 | 第17页 |
| ·痘苗病毒载体 | 第17页 |
| ·腺病毒载体 | 第17-18页 |
| ·腺相关病毒系统 | 第18-19页 |
| 第二章 腺相关病毒 | 第19-23页 |
| 1 腺相关病毒生物学特性 | 第19-20页 |
| 2 腺相关病毒血清型及其应用 | 第20-23页 |
| ·腺相关病毒血清型概述 | 第20页 |
| ·腺相关病毒在临床上的应用 | 第20-21页 |
| ·AAV1 的应用及优势 | 第21页 |
| ·rAAV的制备原理 | 第21-23页 |
| 第三章 腺相关病毒的生产 | 第23-28页 |
| 1 传统的AAV生产方式概述 | 第23-26页 |
| ·质粒转染辅助腺病毒感染的方式 | 第23-24页 |
| ·全质粒转染方式 | 第24页 |
| ·稳定细胞系生产方式 | 第24-26页 |
| 2 杆状病毒-昆虫细胞生产系统 | 第26-28页 |
| 第二部分 研究论文 | 第28-75页 |
| 第一章 实验设计方案及课题内容 | 第29-32页 |
| 1 本课题研究目的和意义 | 第29页 |
| 2 课题出发点 | 第29-30页 |
| 3 实验内容 | 第30-32页 |
| 第二章 重组pFastBacDual载体的构建及菌内转座重组生产重组Bacmid | 第32-53页 |
| 1 实验器材 | 第32-35页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·仪器和设备 | 第32-33页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第33页 |
| ·主要试剂的配制 | 第33-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-47页 |
| ·重组pFBD载体构建 | 第35-44页 |
| ·pFBD-AAV1RepiCapi载体的构建 | 第35-40页 |
| ·PABV359-RFP的构建 | 第40-43页 |
| ·PABV359-AT7 的构建 | 第43-44页 |
| ·重组pFBD载体在DH108ac~(TM)中的转座重组及重组Bacmid的提取 | 第44-47页 |
| ·重组pFBD载体在DH108ac?中的转座重组 | 第44-45页 |
| ·重组Bacmid的大量抽提及PCR鉴定 | 第45-47页 |
| 3 结果 | 第47-51页 |
| ·载体构建PCR及酶切鉴定结果 | 第47-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 重组杆状病毒的包装及相关数据检测 | 第53-75页 |
| 1 实验器材 | 第53-54页 |
| ·材料与试剂 | 第53页 |
| ·仪器和设备 | 第53页 |
| ·荧光定量PCR引物 | 第53-54页 |
| 2 实验方法及结果 | 第54-61页 |
| ·Sf9 细胞的培养 | 第54页 |
| ·重组杆状病毒的包装 | 第54-55页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第55页 |
| ·重组杆状病毒DNA的提取 | 第55页 |
| ·荧光定量PCR测定重组杆状病毒的滴度 | 第55-60页 |
| ·Bac-AAV1RepiCapi的滴度测定 | 第55-57页 |
| ·Bac-AAV1-AT7（Avastin）杆状病毒滴度测定 | 第57-59页 |
| ·Bac-AAV1-RFP 杆状病毒滴度测定 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 第四章 重组AAV的生产、纯化、滴度和活力测定 | 第61-75页 |
| 1 实验器材 | 第61-64页 |
| ·材料与试剂 | 第61页 |
| ·仪器和设备 | 第61-62页 |
| ·试剂的配制 | 第62-64页 |
| 2 实验方法 | 第64-73页 |
| ·Western Blot检测抗体Avastin重轻链的表达 | 第64-65页 |
| ·ELISA 方法检测蛋白的表达量 | 第65-66页 |
| ·rAAV1-RFP的生产 | 第66-67页 |
| ·rAAV1-RFP的二杆状病毒包装系统 | 第66-67页 |
| ·rAAV1-AT7(Avastin)的包装及纯化 | 第67页 |
| ·滴度测定 | 第67-69页 |
| ·rAAV1-RFP基因组滴度测定 | 第67-69页 |
| ·rAAV1-AT7(Avastin)基因组滴度测定 | 第69页 |
| ·病毒生产能力的评估 | 第69-71页 |
| ·病毒活力的检测 | 第71-73页 |
| ·重组AAV1 荧光表达量检测 | 第71页 |
| ·重组AAV1 抗体表达量检测 | 第71-73页 |
| ·rAAV1 包装条件的优化 | 第73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 结论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
