| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-22页 |
| 第一章 综述 | 第22-49页 |
| 1. 乙型肝炎 | 第22-32页 |
| ·乙型肝炎病毒 | 第22-27页 |
| ·乙型肝炎病毒的形态与结构 | 第22-23页 |
| ·乙型肝炎病毒的基因结构 | 第23-24页 |
| ·乙型肝炎病毒的亚型 | 第24-25页 |
| ·乙型肝炎病毒的感染与复制 | 第25-26页 |
| ·病毒性肝炎的发病机理及慢性乙型肝炎的形成 | 第26-27页 |
| ·慢性乙型肝炎的治疗 | 第27-32页 |
| ·干扰素抗乙型肝炎病毒治疗 | 第27-28页 |
| ·核苷类似物抗乙型肝炎病毒治疗 | 第28页 |
| ·免疫调节治疗 | 第28-29页 |
| ·其它治疗方法 | 第29页 |
| ·正在研究的抗乙肝病毒药物 | 第29-31页 |
| ·病毒性肝炎抗病毒治疗存在的问题 | 第31-32页 |
| 2. RNA干扰技术 | 第32-44页 |
| ·RNA干扰的发现及研究进展 | 第33-34页 |
| ·RNA干扰的机制 | 第34-39页 |
| ·概述 | 第34-35页 |
| ·起始RNA的形成 | 第35页 |
| ·RNAi 效应 | 第35-38页 |
| ·RNAi 作用的自我扩增机制 | 第38-39页 |
| ·RNA干扰的特征 | 第39页 |
| ·RNA干扰的生物学意义 | 第39-40页 |
| ·RNA干扰的应用 | 第40-44页 |
| ·高通量研究基因功能 | 第40-41页 |
| ·研究信号传导通路 | 第41页 |
| ·基因治疗 | 第41-44页 |
| 3. 基因肝靶向输送方法 | 第44-47页 |
| ·体内常用基因输送方法 | 第44-45页 |
| ·基因肝靶向输送 | 第45-47页 |
| 4. 研究的目的与内容 | 第47-49页 |
| 第二章 靶序列的选择及siRNA 的合成与表达载体的构建 | 第49-65页 |
| 1. 引言 | 第49-51页 |
| 2. 材料与方法 | 第51-58页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-58页 |
| ·乙型肝炎表面抗原基因的确定 | 第52-53页 |
| ·靶序列的选择 | 第53页 |
| ·siRNA 与化学修饰siRNA 的合成 | 第53页 |
| ·siRNA 表达载体构建与鉴定 | 第53-58页 |
| 3. 实验结果 | 第58-62页 |
| ·乙型肝炎表面抗原基因序列的确定 | 第58-59页 |
| ·靶序列的选择 | 第59页 |
| ·siRNA 合成 | 第59-60页 |
| ·siRNA 表达质粒构建 | 第60-62页 |
| 4. 分析与讨论 | 第62-65页 |
| 第三章 siRNA 及表达载体体外抑制乙肝病毒复制与表达的研究 | 第65-81页 |
| 1. 引言 | 第65-66页 |
| 2. 材料与仪器 | 第66-72页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·实验方法 | 第67-72页 |
| ·细胞培养 | 第67页 |
| ·DOTAP 脂质体的制备 | 第67页 |
| ·细胞转染 | 第67-68页 |
| ·病毒DNA 的提取 | 第68页 |
| ·RNA 提取 | 第68-69页 |
| ·乙肝表面抗原的提取 | 第69页 |
| ·定量PCR 检测乙肝病毒DNA 水平 | 第69页 |
| ·Northern blot | 第69-71页 |
| ·乙肝表面抗原的测定 | 第71-72页 |
| ·统计分析 | 第72页 |
| 3. 结果 | 第72-77页 |
| ·siRNA 和siRNA 表达载体对靶m RNA 的降解 | 第72页 |
| ·针对不同靶点siRNA 对乙肝表面抗原表达的抑制作用 | 第72-73页 |
| ·不同结构siRNA 对乙肝表面抗原合成的抑制作用 | 第73-74页 |
| ·siRNA 抑制乙肝病毒的复制与表达 | 第74-75页 |
| ·siRNA 抑制HepG2.2.15 细胞表面抗原形成的剂量效应 | 第75-76页 |
| ·siRNA 在HepG2.2.15 中抑制乙肝表面抗原形成的时间效应 | 第76-77页 |
| 4. 讨论 | 第77-81页 |
| 第四章 siRNA 及表达载体体内抑制乙肝病毒复制与表达的研究 | 第81-93页 |
| 1. 引言 | 第81-82页 |
| 2. 材料与方法 | 第82-84页 |
| ·材料 | 第82-83页 |
| ·实验方法 | 第83-84页 |
| ·肝靶向基因输送 | 第83页 |
| ·电脉冲转染 | 第83页 |
| ·肝组织总RNA 提取 | 第83页 |
| ·Northern blot | 第83-84页 |
| ·血液采集与HBsAg 及HBsAb 分离 | 第84页 |
| ·肝脏和肌肉组织HBsAg 分离 | 第84页 |
| ·HBsAg 和HBsAb 检测 | 第84页 |
| ·统计分析 | 第84页 |
| 3. 结果 | 第84-90页 |
| ·siRNA 与siRNA 表达载体在体内降解乙肝表面抗原m RNA 并抑制表面抗原的形成 | 第84-85页 |
| ·siRNA 与siRNA 表达载体抑制乙肝表面抗原形成的剂量效应 | 第85-86页 |
| ·不同形态siRNA 在体内抑制乙肝表面抗原形成的时间效应 | 第86-87页 |
| ·不同形态siRNA 对预先存在体内乙肝表面抗原表达质粒表达的干扰作用 | 第87-89页 |
| ·siRNA 表达质粒在肌肉内抑制乙肝表面抗原质粒的表达和表面抗体的诱导形成 | 第89-90页 |
| 4. 讨论 | 第90-93页 |
| 第五章 提高外源基因体内外转染效率的研究 | 第93-105页 |
| 1. 引言 | 第93-94页 |
| 2. 材料与方法 | 第94-96页 |
| ·材料 | 第94页 |
| ·方法 | 第94-96页 |
| ·含钆喷酸葡胺或碘海醇阳离子脂质体的制备 | 第94-95页 |
| ·细胞培养和转染 | 第95页 |
| ·多室脂质体的制备及体内输送 | 第95页 |
| ·肝脏介入输送 | 第95页 |
| ·尾静脉高压注射 | 第95页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第95页 |
| ·乙肝表面抗原检测 | 第95-96页 |
| 3. 结果 | 第96-102页 |
| ·阳离子脂质体转染细胞的研究 | 第96-100页 |
| ·DOTAP-钆喷酸葡胺脂质体提高质粒DNA 对细胞的转染 | 第96-97页 |
| ·DOTAP-碘海醇脂质体提高质粒DNA 对细胞的转染 | 第97-100页 |
| ·质粒DNA 肝靶向输送的研究 | 第100-102页 |
| ·门静脉介入输送提高质粒在肝脏内的表达 | 第100页 |
| ·阳离子脂质体和多室脂质体对质粒DNA 肝靶向输送的作用 | 第100-101页 |
| ·尾静脉高压注射(hydrodynamic injection)提高质粒肝靶向表达 | 第101-102页 |
| 4. 讨论 | 第102-105页 |
| 第六章 乙肝 DNA 疫苗电转染免疫在诱导小鼠免疫应答和抗乙肝病毒感染的作用研究 | 第105-118页 |
| 1. 引言 | 第105-106页 |
| 2. 材料与方法 | 第106-109页 |
| ·材料 | 第106页 |
| ·实验方法 | 第106-109页 |
| ·DNA 疫苗（乙肝表面抗原表达质粒）免疫 | 第106页 |
| ·乙肝表面抗原表达质粒肝靶向输送 | 第106-107页 |
| ·乙肝表面抗原和表面抗体的分离 | 第107页 |
| ·乙肝表面抗原和表面抗体的检测 | 第107页 |
| ·IFN-γ水平检测 | 第107-108页 |
| ·肝脏表达HBsAg 的免疫组化检测 | 第108页 |
| ·肝组织H&E 检测 | 第108-109页 |
| ·丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测 | 第109页 |
| ·统计分析 | 第109页 |
| 3. 结果 | 第109-115页 |
| ·电脉冲刺激提高外源基因的表达 | 第109-110页 |
| ·电转染提高DNA 质粒诱导的体液和细胞免疫应答 | 第110-112页 |
| ·DNA 疫苗电转染诱导的免疫应答对乙肝病毒感染的保护作用 | 第112-113页 |
| ·肝脏乙肝表面抗原表达的免疫组化分析 | 第113-115页 |
| ·小鼠血液中丙氨酸氨基转移酶的变化 | 第115页 |
| 4. 讨论 | 第115-118页 |
| 第七章 总结与展望 | 第118-121页 |
| 参考文献 | 第121-140页 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第140页 |
| 攻读博士学位期间发表会议论文情况 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
