中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-8页 |
引言 | 第8-9页 |
第一章 文献综述 | 第9-30页 |
第二章 天南星凝集素基因的克隆 | 第30-51页 |
一、 材料与试剂 | 第30页 |
二、 实验方法 | 第30-42页 |
(一) 通过3'RACE获得目的基因的3'端片断 | 第30-35页 |
(二) 通过5'RACE获得目的基因的5'端片断 | 第35-38页 |
(三) 扩增全长目的基因 | 第38-39页 |
(四) Southern blot分析 | 第39-42页 |
(五) Northern blot分析 | 第42页 |
三、 结果和讨论 | 第42-51页 |
(一) AHA全长cDNA序列及分析 | 第42-46页 |
(二) AHA和其它的单子叶植物甘露糖结合凝集素的序列比较 | 第46-47页 |
(三) 分析AHA的二级结构和三级结构 | 第47-49页 |
(四) Southern blot分析 | 第49页 |
(五) Northern blot分析 | 第49-51页 |
第三章 天南星凝集素基因的原核表达、蛋白纯化和抗虫分析 | 第51-66页 |
一、 材料与试剂 | 第51-52页 |
二、 实验方法 | 第52-59页 |
(一) 原核表达载体的构建 | 第52-53页 |
(二) 目的蛋白的诱导表达及纯化 | 第53-57页 |
(三) 蚜虫人工饲养与纯化的天南星凝集素抗蚜效应测定 | 第57-59页 |
三、 结果和讨论 | 第59-66页 |
(一) 原核表达载体的构建及分析 | 第59-60页 |
(二) 目的蛋白的诱导表达结果 | 第60-61页 |
(三) 不同时间诱导的目的蛋白的表达分析 | 第61页 |
(四) 表达产物的Westernblot分析 | 第61-62页 |
(五) 天南星凝集素重组蛋白的纯化 | 第62-63页 |
(六) 天南星凝集素重组蛋白对蚜虫的抗性结果分析 | 第63-66页 |
第四章 天南星凝集素基因转化烟草及抗蚜虫分析 | 第66-80页 |
一、 材料与试剂 | 第66-67页 |
二、 实验方法 | 第67-76页 |
(一) 植物表达载体pBI121-AHA的构建 | 第67-72页 |
(二) 叶盘法转化烟草 | 第72-73页 |
(三) 转基因植株的分子检测 | 第73-75页 |
(四) 转基因阳性植株的抗蚜虫分析 | 第75-76页 |
三、 结果和讨论 | 第76-80页 |
(一) 表达载体pBI121-AHA的构建及分析 | 第76-77页 |
(二) 转基因植株的分子检测 | 第77-78页 |
(三) 转基因植株的抗虫结果及分析 | 第78-80页 |
第五章 石蒜凝集素基因的克隆 | 第80-86页 |
一、 材料与试剂 | 第80页 |
二、 实验方法 | 第80-81页 |
(一) 石蒜凝集素基因的克隆 | 第80-81页 |
(二) Western blot分析石蒜凝集素成熟蛋白 | 第81页 |
(三) Southern blot分析石蒜基因组DNA | 第81页 |
(四) Northern blot分析石蒜各种组织中lra的表达情况 | 第81页 |
三、 结果和讨论 | 第81-86页 |
(一) 石蒜凝集素基因的序列和分析 | 第81-83页 |
(二) Southern blot结果分析 | 第83页 |
(三) Northern blot结果分析 | 第83-84页 |
(四) Western blot结果分析 | 第84-86页 |
参考文献 | 第86-100页 |
小结 | 第100-101页 |
致谢 | 第101-102页 |
附录 | 第102-103页 |
发表论文 | 第103-104页 |