| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-14页 |
| ·真菌中的信号转导途径 | 第11页 |
| ·Ras 基因功能研究现状 | 第11-12页 |
| ·基因功能的研究方法 | 第12页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第12-14页 |
| 2 材料和方法 | 第14-29页 |
| ·菌株、寄主和质粒 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14页 |
| ·试剂及溶液 | 第14-15页 |
| ·仪器和设备 | 第15页 |
| ·StRas2 基因RNAi 载体构建 | 第15-20页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第15-16页 |
| ·引物的设计 | 第16页 |
| ·PCR 扩增 | 第16-17页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶回收 | 第17页 |
| ·PCR 扩增产物的克隆测序 | 第17-18页 |
| ·阳性克隆质粒的提取 | 第18页 |
| ·pSilent-1 质粒及StRas2-F 片段阳性克隆质粒的酶切 | 第18-19页 |
| ·pSilent-1 质粒与StRas2-F 片段的连接、转化及验证 | 第19页 |
| ·pSilent-StRas2-F 质粒及StRas2-R 片段阳性克隆质粒的酶切 | 第19-20页 |
| ·pSilent-StRas2-F 质粒与StRas2-R 片段的连接、转化及验证 | 第20页 |
| ·StRas2 基因超表达及对照载体构建 | 第20-24页 |
| ·总RNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·总RNA 的纯化 | 第21页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第21页 |
| ·引物的设计 | 第21-22页 |
| ·PCR 扩增 | 第22页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶回收、克隆测序和阳性克隆质粒的提取 | 第22页 |
| ·pSM565 质粒及StRas2、eGFP 基因阳性克隆质粒的酶切 | 第22-23页 |
| ·pSM565 质粒及StRas2、eGFP 基因的连接、转化及验证 | 第23-24页 |
| ·StRas2 基因RNAi 转化子的获得 | 第24-25页 |
| ·StRas2 基因RNAi 重组载体转化玉米大斑病菌原生质体 | 第24-25页 |
| ·PCR 验证转化子 | 第25页 |
| ·RT-PCR 分析StRas2 基因的表达量 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR 分析引物的设计 | 第25-26页 |
| ·cDNA 模板量的确定 | 第26页 |
| ·转化子的生物学性状分析 | 第26-29页 |
| ·转化子菌株的形态特征与生长速率测定 | 第26-27页 |
| ·转化子菌株产孢量测定及分生孢子形态显微观察 | 第27页 |
| ·转化子的附着胞形态及侵染能力的显微观察 | 第27页 |
| ·转化子附着胞膨压的测定 | 第27页 |
| ·转化子菌株的致病力分析 | 第27-28页 |
| ·转化子产生毒素分析 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-48页 |
| ·StRas2 基因的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| ·StRas2 基因编码氨基酸的保守结构域分析 | 第29页 |
| ·StRas2 基因编码氨基酸序列的同源比对分析 | 第29-30页 |
| ·基因组DNA 和总RNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·StRas2 基因RNAi 载体构建 | 第31-34页 |
| ·基因沉默载体的构建策略 | 第31-32页 |
| ·StRas2 基因片段的克隆及验证 | 第32页 |
| ·StRas2 基因片段和pSilent-1 质粒的酶切 | 第32-33页 |
| ·StRas2 基因的RNA 干扰载体的验证 | 第33-34页 |
| ·StRas2 基因RNAi 转化子的获得 | 第34-36页 |
| ·StRas2 基因RNA 干扰载体转化及筛选 | 第34-35页 |
| ·StRas2 基因RNAi 转化子半定量RT-PCR 验证 | 第35-36页 |
| ·RNAi 转化子的表型特征分析 | 第36-42页 |
| ·RNAi 转化子的形态学特征 | 第36页 |
| ·转化子菌株的菌丝形态 | 第36-37页 |
| ·转化子菌株的生长速率 | 第37页 |
| ·转化子菌株的产孢量及分生孢子形态 | 第37-38页 |
| ·转化子菌株附着胞的形成及侵染 | 第38-39页 |
| ·转化子菌株附着胞的膨压 | 第39-40页 |
| ·转化子菌株的致病力 | 第40-41页 |
| ·转化子菌株的毒素产生 | 第41页 |
| ·转化子菌株的Ca~(2+)及cAMP 信号途径活性测定 | 第41-42页 |
| ·StRas2 基因超表达载体构建 | 第42-45页 |
| ·基因超表达融合载体的构建策略 | 第42页 |
| ·StRas2 及eGFP 基因的克隆及验证 | 第42-44页 |
| ·StRas2、eGFP 和pSM565 质粒的酶切 | 第44页 |
| ·StRas2 基因的超表达融合载体的验证 | 第44-45页 |
| ·对照载体构建 | 第45-48页 |
| ·基因对照载体的构建策略 | 第45-46页 |
| ·eGFP 基因的克隆及验证 | 第46页 |
| ·eGFP 和 pSM565 质粒的酶切 | 第46-47页 |
| ·eGFP 基因的对照载体的验证 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| ·研究基因功能的方法与优势 | 第48-49页 |
| ·遗传体系的建立为基因功能研究奠定了良好基础 | 第49页 |
| ·StRas2 基因是否调控了玉米大斑病菌的生长、发育与致病性? | 第49-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
