果树单染色体及其R基因同源序列的分离与克隆
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 缩写符号注释 | 第13-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 文献综述 | 第16-41页 |
| 1 果树基因组研究进展 | 第16-24页 |
| 1．1 种质资源研究 | 第16-18页 |
| 1．2 遗传图谱的构建 | 第18-19页 |
| 1．3 物理图谱的构建 | 第19-20页 |
| 1．4 基因定位 | 第20-21页 |
| 1．4．1 质量性状基因定位 | 第20页 |
| 1．4．2 数量性状基因定位 | 第20-21页 |
| 1．5 标记辅助选择育种 | 第21-22页 |
| 1．6 基因克隆 | 第22-23页 |
| 1．7 比较基因组研究 | 第23页 |
| 1．8 功能基因组研究 | 第23-24页 |
| 1．9 问题和展望 | 第24页 |
| 2 植物染色体微分离微克隆技术研究进展 | 第24-31页 |
| 2．1 染色体微分离微克隆技术 | 第25-28页 |
| 2．1．1 染色体标本的制备与目标染色体的辨认 | 第25-26页 |
| 2．1．2 染色体的显微切割和分离 | 第26-27页 |
| 2．1．3 微克隆 | 第27-28页 |
| 2．1．4 微克隆文库的鉴定 | 第28页 |
| 2．2 植物染色体微分离微克隆技术的应用 | 第28-31页 |
| 2．2．1 建立单染色体高密度分子标记连锁图谱 | 第29页 |
| 2．2．2 分离重要基因 | 第29页 |
| 2．2．3 构建基因组物理图谱 | 第29-30页 |
| 2．2．4 染色体进化和比较基因组研究 | 第30页 |
| 2．2．5 在果树基因组研究中的应用价值 | 第30-31页 |
| 3 植物抗病基因（R基因）研究进展 | 第31-41页 |
| 3．1 R基因产物的结构特征 | 第31-32页 |
| 3．2 R基因的类别 | 第32-33页 |
| 3．3 R基因的功能 | 第33-35页 |
| 3．4 R基因的数目与分布 | 第35-36页 |
| 3．5 R基因克隆的策略与方法 | 第36-38页 |
| 3．6 果树R基因的克隆 | 第38-41页 |
| 第一章 果树单染色体显微分离 | 第41-51页 |
| 1 材料与方法 | 第41-43页 |
| 1．1 供试材料 | 第41页 |
| 1．2 染色体标本的制备 | 第41-42页 |
| 1．2．1 材料准备 | 第41-42页 |
| 1．2．2 染色体标本制备方法 | 第42页 |
| 1．3 染色体核型分析与染色体的辨认 | 第42页 |
| 1．4 微细玻璃针的制备 | 第42页 |
| 1．5 染色体的显微分离 | 第42-43页 |
| 1．5．1 粘取法 | 第43页 |
| 1．5．2 挖取法 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-48页 |
| 2．1 染色体标本制备 | 第43-45页 |
| 2．1．1 银杏 | 第43-44页 |
| 2．1．2 柚 | 第44-45页 |
| 2．2 染色体的观察与核型分析 | 第45-46页 |
| 2．3 玻璃针的制备 | 第46页 |
| 2．4 染色体的显微分离 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| 3．1 染色体微分离对染色体标本的特殊要求 | 第49页 |
| 3．2 染色体微分离对玻璃针的要求 | 第49-50页 |
| 3．3 染色体微分离的关键技术 | 第50页 |
| 3．4 特定染色体的微分离 | 第50-51页 |
| 第二章 单染色体的体外扩增与克隆 | 第51-62页 |
| 1 材料与方法 | 第51-56页 |
| 1．1 材料 | 第51页 |
| 1．2 单染色体的体外扩增 | 第51-53页 |
| 1．2．1 蛋白酶K消化 | 第51页 |
| 1．2．2 LA-PCR | 第51-52页 |
| 1．2．2．1 Sau3A酶切 | 第51-52页 |
| 1．2．2．2 接头的制备 | 第52页 |
| 1．2．2．3 接头连接 | 第52页 |
| 1．2．2．4 PCR反应 | 第52页 |
| 1．2．3 DOP-PCR | 第52-53页 |
| 1．3 Southern杂交验证扩增产物 | 第53-55页 |
| 1．3．1 基因组DNA的制备 | 第53页 |
| 1．3．2 转膜 | 第53-54页 |
| 1．3．3 探针的制备与标记效率检测 | 第54页 |
| 1．3．4 预杂交 | 第54页 |
| 1．3．5 杂交 | 第54页 |
| 1．3．6 洗膜 | 第54页 |
| 1．3．7 检测 | 第54-55页 |
| 1．4 单染色体PCR产物的克隆 | 第55-56页 |
| 1．4．1 PCR产物的纯化 | 第55页 |
| 1．4．2 与载体的连接反应 | 第55-56页 |
| 1．4．3 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第56页 |
| 1．4．4 连接产物的转化 | 第56页 |
| 1．4．5 重组克隆的筛选 | 第56页 |
| 1．5 重组克隆的插入片段大小分析 | 第56页 |
| 1．5．1 质粒DNA的制备 | 第56页 |
| 1．5．2 克隆片段大小分析 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-60页 |
| 2．1 单染色体的体外扩增 | 第56-58页 |
| 2．2 Southern杂交验证扩增产物 | 第58-59页 |
| 2．3 单染色体DNA文库的构建与分析 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 3．1 单染色体体外扩增的意义 | 第60页 |
| 3．2 单染色体体外扩增的污染问题 | 第60-61页 |
| 3．3 单染色体DNA库的应用价值 | 第61-62页 |
| 第三章 单染色体R基因同源序列的克隆与分析 | 第62-73页 |
| 1 材料与方法 | 第63-65页 |
| 1．1 材料 | 第63页 |
| 1．2 基因组DNA的提取 | 第63页 |
| 1．3 总RNA的提取 | 第63页 |
| 1．4 cDNA的合成 | 第63页 |
| 1．5 染色体的显微分离 | 第63页 |
| 1．6 单染色体DNA库的构建 | 第63页 |
| 1．7 引物的选用与合成 | 第63-64页 |
| 1．8 PCR反应 | 第64页 |
| 1．9 扩增产物的回收与克隆 | 第64页 |
| 1．10 克隆片段的酶切归类复筛 | 第64页 |
| 1．11 克隆片段的酶切归类 | 第64页 |
| 1．12 测序与序列分析 | 第64-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-70页 |
| 2．1 基因组DNA中RGA的扩增与分离 | 第65页 |
| 2．2 cDNA中RGA的扩增与分离 | 第65-66页 |
| 2．3 单染色体RGA的分离 | 第66-70页 |
| 2．3．1 染色体的显微分离 | 第66页 |
| 2．3．2 单染色体RGA的扩增结果 | 第66-67页 |
| 2．3．3 RGA的获得与分析 | 第67-70页 |
| 3 讨论 | 第70-73页 |
| 3．1 单染色体同源扩增技术的意义 | 第70-71页 |
| 3．2 两种扩增方法的比较 | 第71页 |
| 3．3 引物的选用与物种的差异 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附录1 | 第87-88页 |
| 附录2 | 第88-91页 |
