| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-13页 |
| 上篇 文献综述 | 第13-49页 |
| 第一章 兰花培育技术发展史及大花蕙兰育种技术现状 | 第13-25页 |
| 1 兰花产业发展历史简介 | 第13-16页 |
| ·洋兰培育历史 | 第13-14页 |
| ·国兰培育历史 | 第14-15页 |
| ·亚洲兰花培育历史 | 第15-16页 |
| 2 兰花现代育种技术的发展 | 第16-20页 |
| ·兰属植物杂交育种进展 | 第16-19页 |
| ·种间杂交育种进展 | 第16-18页 |
| ·属间远缘杂交 | 第18-19页 |
| ·我国兰属植物育种现状 | 第19-20页 |
| 3 大花蕙兰育种技术现状及进展 | 第20-25页 |
| ·大花蕙兰发展简史 | 第20页 |
| ·组织培养技术在大花蕙兰培育上的应用 | 第20-22页 |
| ·外植体的选择 | 第21页 |
| ·基本培养基的选择 | 第21页 |
| ·植物生长调节剂对大花蕙兰增殖与分化影响的研究 | 第21页 |
| ·添加物对大花蕙兰分化及增殖影响的研究 | 第21页 |
| ·无糖培养 | 第21-22页 |
| ·大花蕙兰栽培技术 | 第22-23页 |
| ·营养生长阶段 | 第22页 |
| ·花芽分化与开花 | 第22-23页 |
| ·大花蕙兰的育种 | 第23-25页 |
| ·主要亲本原生种 | 第23-24页 |
| ·主要育种方法及手段 | 第24页 |
| ·品种选育新动向 | 第24-25页 |
| 第二章 兰花生物技术及基因工程研究现状 | 第25-40页 |
| 1 分子标记技术在兰花分子遗传学上的应用 | 第25-26页 |
| ·分子标记技术用于栽培品种的鉴定及分类 | 第25-26页 |
| ·分子标记技术用于遗传多样性与群体遗传结构分析 | 第26页 |
| ·分子标记技术用于兰花病毒研究 | 第26页 |
| 2 功能基因的分离克隆 | 第26-28页 |
| ·色素相关基因的分离克隆 | 第26-27页 |
| ·兰花病原菌蛋白基因的分离克隆 | 第27页 |
| ·兰花花器官发育相关基因 | 第27页 |
| ·兰花子房发育相关基因 | 第27-28页 |
| 4 基因工程研究 | 第28-38页 |
| ·转基因技术 | 第29-36页 |
| ·基因枪法（微弹法、粒子轰击法） | 第29-30页 |
| ·农杆菌介导法 | 第30-36页 |
| ·其它转化方法 | 第36页 |
| ·转入的目的基因 | 第36-37页 |
| ·报告基因 | 第36页 |
| ·与开花有关的基因 | 第36-37页 |
| ·抗病毒基因 | 第37页 |
| ·转化子的筛选与检测 | 第37-38页 |
| 5 兰花细胞工程研究 | 第38-39页 |
| ·体细胞胚的诱导 | 第38页 |
| ·原生质体融合技术 | 第38-39页 |
| 6 展望 | 第39-40页 |
| 第三章 大花蕙兰主要病害的发病机理、诊断与防治 | 第40-49页 |
| 1 病毒性病害 | 第40-41页 |
| ·大花蕙兰花叶病毒病 | 第40-41页 |
| ·大花蕙兰环斑病毒病 | 第41页 |
| 2 细菌性病害 | 第41-43页 |
| ·细菌性软腐病 | 第41-42页 |
| ·细菌性蘖腐病 | 第42页 |
| ·细菌性褐斑病 | 第42-43页 |
| 3 真菌性病害 | 第43-48页 |
| ·疫霉病 | 第43-44页 |
| ·炭疽病 | 第44-45页 |
| ·根腐病 | 第45页 |
| ·白绢病 | 第45-46页 |
| ·花腐病 | 第46-47页 |
| ·叶枯病 | 第47页 |
| ·煤烟病 | 第47-48页 |
| 4 小结 | 第48-49页 |
| 下篇 研究报告 | 第49-125页 |
| 第四章 大花蕙兰幼苗叶片诱导类原球茎研究 | 第49-56页 |
| 1 材料与方法 | 第49-50页 |
| ·供试材料 | 第49页 |
| ·外植体取样 | 第49页 |
| ·基本培养基与培养条件 | 第49-50页 |
| ·实验设计 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-55页 |
| ·不同叶片部位诱导PLB 的差异 | 第51-52页 |
| ·不同激素水平组合对叶片诱导PLB 的差异 | 第52-54页 |
| ·大花蕙兰不同基因型对叶片诱导PLB 的影响 | 第54页 |
| ·不同处理因素的方差分析 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 大花蕙兰试管苗基部切块诱导类原球茎研究 | 第56-64页 |
| 1 材料与方法 | 第56-57页 |
| ·供试材料 | 第56页 |
| ·外植体取样 | 第56页 |
| ·基本培养基与培养条件 | 第56-57页 |
| ·实验设计与计算方法 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-61页 |
| ·添加不同浓度激素对试管苗基部切块诱导PLB 的影响 | 第58-59页 |
| ·大花蕙兰不同基因型对试管苗基部切块诱导PLB 的影响 | 第59-60页 |
| ·不同处理因素的方差分析 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-64页 |
| 第六章 大花蕙兰对抗生素敏感性研究 | 第64-70页 |
| 1 材料与方法 | 第64-65页 |
| ·大花蕙兰对Km 选择压的敏感性试验 | 第64页 |
| ·不同抗生素抑菌效果实验 | 第64-65页 |
| ·大花蕙兰对抑菌抗生素Cef 的敏感性试验 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-68页 |
| ·大花蕙兰对Km 选择压的敏感性试验 | 第65-67页 |
| ·不同抗生素抑菌实验 | 第67-68页 |
| ·大花蕙兰对Cef 的敏感性试验 | 第68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 第七章 农杆菌介导双价抗病基因转化大花蕙兰 | 第70-92页 |
| 1 材料与方法 | 第70-80页 |
| ·实验材料 | 第70-72页 |
| ·植物受体材料及其培养基 | 第70-71页 |
| ·质粒载体构建及工程菌株制备 | 第71-72页 |
| ·实验设计与方法 | 第72-80页 |
| ·农杆菌介导转化大花蕙兰前期试验 | 第73-75页 |
| ·农杆菌介导转化大花蕙兰中期试验 | 第75-79页 |
| ·农杆菌介导转化大花蕙兰优化试验 | 第79页 |
| ·转化子的筛选和转基因植株的获得 | 第79-80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-90页 |
| ·农杆菌介导转化大花蕙兰前期试验 | 第80-83页 |
| ·农杆菌侵染浓度对转化的影响 | 第80-81页 |
| ·共培养阶段培养基pH 值对转化的影响 | 第81-82页 |
| ·预培养添加乙酰丁香酮(AS)对转化的影响 | 第82页 |
| ·方差分析 | 第82-83页 |
| ·农杆菌介导转化大花蕙兰中期试验 | 第83-86页 |
| ·预培养时间对转化的影响 | 第83-84页 |
| ·共培养时间对转化的影响 | 第84-85页 |
| ·侵染时间对转化的影响 | 第85-86页 |
| ·方差分析 | 第86页 |
| ·农杆菌介导转化大花蕙兰优化试验 | 第86-88页 |
| ·转化子的筛选和转基因植株的获得 | 第88-90页 |
| ·转化子的筛选 | 第88-89页 |
| ·大花蕙兰抗Km 转基因植株的获得 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 第八章 大花蕙兰基因组DNA 提取 | 第92-97页 |
| 1 材料与方法 | 第92-93页 |
| ·实验材料 | 第92页 |
| ·试剂 | 第92页 |
| ·实验方法 | 第92-93页 |
| ·大花蕙兰材料的准备 | 第92页 |
| ·SDS 裂解法提取DNA | 第92页 |
| ·CTAB 裂解法提取DNA | 第92-93页 |
| ·DNA 测定 | 第93页 |
| ·PCR 扩增试验 | 第93页 |
| 2 结果和分析 | 第93-95页 |
| ·DNA 的提取 | 第93-94页 |
| ·多糖及次生代谢物质 | 第94-95页 |
| ·PCR 扩增试验 | 第95页 |
| 3 讨论 | 第95-97页 |
| 第九章 大花蕙兰叶片总RNA 提取 | 第97-102页 |
| 1 材料与方法 | 第97-99页 |
| ·实验材料的准备 | 第97-98页 |
| ·分子检测所需主要药品与试剂 | 第97页 |
| ·大花蕙兰样品材料的准备 | 第97页 |
| ·RNase 的灭活 | 第97页 |
| ·提取用溶液的制备 | 第97-98页 |
| ·实验方法 | 第98-99页 |
| ·SDS 法提取RNA | 第98页 |
| ·异硫氰酸胍法提取RNA | 第98页 |
| ·RNA 纯化 | 第98页 |
| ·RNA 纯度及其完整性检测 | 第98-99页 |
| 2 结果与分析 | 第99-100页 |
| ·SDS 法提取总RNA 琼脂糖胶电泳检测 | 第99页 |
| ·异硫氰酸胍法提取大花蕙兰叶片总RNA | 第99-100页 |
| ·紫外分光光度计检测结果 | 第100页 |
| 3 讨论 | 第100-102页 |
| 第十章 大花蕙兰转基因植株分子检测 | 第102-107页 |
| 1 材料与方法 | 第102-104页 |
| ·材料 | 第102页 |
| ·实验试剂 | 第102页 |
| ·仪器与设备 | 第102页 |
| ·特异引物PCR 检测 | 第102-103页 |
| ·Southern blot 检验 | 第103-104页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第104页 |
| 2 结果与分析 | 第104-106页 |
| ·特异引物PCR 检测 | 第104-105页 |
| ·Southern blot 检验 | 第105页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第105-106页 |
| 3 讨论 | 第106-107页 |
| 第十一章 大花蕙兰病害病原菌分离与鉴定及生物学特性 | 第107-112页 |
| 1 材料与方法 | 第107-108页 |
| ·病害症状的观察 | 第107页 |
| ·标本采集和病原菌分离 | 第107页 |
| ·培养菌落和形态观察 | 第107页 |
| ·柯赫氏法则验证 | 第107页 |
| ·病原菌生物学特性 | 第107-108页 |
| 2 结果与分析 | 第108-110页 |
| ·病害症状 | 第108页 |
| ·病原菌分离、菌落和及其形态特征 | 第108-109页 |
| ·柯赫氏法则验证 | 第109页 |
| ·病原菌生物学特性 | 第109-110页 |
| 3 讨论 | 第110-112页 |
| 第十二章 大花蕙兰转基因植株的抗病性测试 | 第112-116页 |
| 1 材料与方法 | 第112-114页 |
| ·叶片蛋白提取物抑菌试验 | 第112页 |
| ·大花蕙兰可溶性总蛋白的提取 | 第112页 |
| ·离体抑菌活性检测 | 第112页 |
| ·炭疽病病菌接种大花蕙兰实验 | 第112-114页 |
| ·炭疽病菌分生孢子悬浮液制备 | 第112页 |
| ·炭疽病菌分生孢子接种离体大花蕙兰叶片 | 第112-113页 |
| ·病情调查与分级标准 | 第113-114页 |
| 2 结果与分析 | 第114-115页 |
| ·离体抑菌实验 | 第114-115页 |
| ·离体叶片接种实验 | 第115页 |
| 3 讨论 | 第115-116页 |
| 第十三章 总结与讨论 | 第116-125页 |
| 1 大花蕙兰植株再生体系的建立 | 第116-118页 |
| ·通过叶片诱导大花蕙兰PLB | 第116-117页 |
| ·通过基部切块诱导大花蕙兰PLB | 第117-118页 |
| 2 大花蕙兰对抗生素敏感性研究 | 第118-119页 |
| ·大花蕙兰对Km 的敏感性 | 第118页 |
| ·不同抗生素抑菌效果 | 第118页 |
| ·大花蕙兰对Cef 的敏感性 | 第118-119页 |
| 3 农杆菌介导基因转化大花蕙兰 | 第119-120页 |
| ·预培养培养基添加乙酰丁香酮(AS)对转化频率的影响 | 第119页 |
| ·侵染液农杆菌浓度对大花蕙兰转化的影响 | 第119页 |
| ·共培养阶段培养基pH 值对大花蕙兰转化的影响 | 第119页 |
| ·预培养时间对大花蕙兰转化的影响 | 第119-120页 |
| ·共培养时间对大花蕙兰转化的影响 | 第120页 |
| ·侵染时间对大花蕙兰转化的影响 | 第120页 |
| 4 大花蕙兰转基因植株的分子检测 | 第120-121页 |
| ·大花蕙兰基因组DNA 提取 | 第120页 |
| ·大花蕙兰叶片总RNA 提取 | 第120-121页 |
| ·大花蕙兰转基因植株分子检测 | 第121页 |
| 5 大花蕙兰病害病原菌分离与鉴定 | 第121页 |
| 6 大花蕙兰转基因植株抗病性测定 | 第121-122页 |
| 7 存在的问题和展望 | 第122-123页 |
| ·关于启动子 | 第122页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第122页 |
| ·转基因植株的抗病性测定 | 第122-123页 |
| 8 本研究的创新点 | 第123-125页 |
| ·从大花蕙兰试管苗叶组织诱导类原球茎(PLB) | 第123页 |
| ·从大花蕙兰试管苗基部切块诱导类原球茎(PLB) | 第123页 |
| ·结合混合梯度方法优化转基因研究 | 第123页 |
| ·对乙酰丁香酮(AS)添加方法的改进 | 第123-124页 |
| ·PLB 诱导阶段筛选 | 第124页 |
| ·转化子继代诱导PLB 抗Km 一致性筛选 | 第124页 |
| ·建立了大花蕙兰离体叶片接种的抗病性检测技术 | 第124页 |
| ·抗病转基因大花蕙兰的培育 | 第124-125页 |
| 参考文献（References） | 第125-135页 |
| 详细摘要 | 第135-142页 |
