| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1 昆虫杆状病毒表达系统 | 第12-15页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第12-13页 |
| ·杆状病毒Bac-to-Bac表达系统 | 第13-15页 |
| 2 影响杆状病毒表达系统表达效率的主要问题 | 第15-18页 |
| ·外源蛋白的蛋白酶降解 | 第15-16页 |
| ·多角体蛋白的表达量高而稳定 | 第16页 |
| ·多角体基因启动子序列对外源蛋白表达的影响 | 第16-17页 |
| ·密码子的使用频率对蛋白翻译效率的影响 | 第17-18页 |
| 3 多角体基因详细结构、蛋白质组成分析 | 第18-21页 |
| ·多角体蛋白基因和mRNA结构 | 第18-19页 |
| ·多角体蛋白基因和氨基酸序列的保守性 | 第19-20页 |
| ·多角体蛋白的重要功能序列 | 第20页 |
| ·预测的二级结构及亲水性 | 第20-21页 |
| 4 提高外源基因表达水平研究综述 | 第21-22页 |
| 5 多角体结构及组装机制的研究进展 | 第22-23页 |
| 6 利用多角体蛋白进行融合表达及固定外源蛋白质的研究进展 | 第23-24页 |
| 7 本研究的目的与科学意义 | 第24-25页 |
| 第二章 BMNPV多角体基因分段克隆表达研究 | 第25-48页 |
| 1 研究方案 | 第25页 |
| 2 实验材料 | 第25-26页 |
| 3 实验方法 | 第26-37页 |
| ·各种重组供体质粒的构建 | 第26-32页 |
| ·分段克隆BmNPV polh基因和重组供体质粒鉴定的引物设计 | 第26-28页 |
| ·BmNPV基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·BmNPV polh基因分段克隆 | 第28-29页 |
| ·BmNPV polh基因和供体质粒pFastBacHT的酶切 | 第29页 |
| ·载体和目的片段的割胶回收 | 第29-30页 |
| ·载体与目的片段的连接 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第30-31页 |
| ·重组供体质粒的抽提与鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组Bacmid的构建和鉴定 | 第32-35页 |
| ·BmDH10Bac感受态的制备 | 第32页 |
| ·转座转化 | 第32-33页 |
| ·重组Bacmid的抽提 | 第33页 |
| ·重组Bacmid DNA的PCR鉴定 | 第33-35页 |
| ·细胞转染与重组病毒的收获 | 第35-36页 |
| ·Bacmid DNA转染 | 第35页 |
| ·重组病毒的收获 | 第35-36页 |
| ·二次感染 | 第36页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE | 第36-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-45页 |
| ·BmNPV多角体基因分段克隆 | 第38页 |
| ·BmNPV多角体基因片段和供体质粒pFastBacHT双酶切后割胶回收 | 第38-39页 |
| ·各种重组供体质粒的鉴定 | 第39-43页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第39页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·测序结果 | 第40-43页 |
| ·各种重组Bacmid DNA的鉴定 | 第43页 |
| ·显微镜检测各种重组病毒感染情况 | 第43-44页 |
| ·蛋白质检测与分析 | 第44-45页 |
| 5 讨论 | 第45-48页 |
| 第三章 BMNPV多角体基因与外源目的基因融合表达研究 | 第48-63页 |
| 1 研究方案 | 第48-49页 |
| 2 实验材料 | 第49页 |
| 3 实验方法 | 第49-54页 |
| ·各种重组供体质粒的构建和鉴定 | 第49-51页 |
| ·外源目的基因EGFP引物设计及EGFP的克隆 | 第49-50页 |
| ·新型供体质粒与外源基因EGFP的酶切、连接、转化 | 第50页 |
| ·融合外源基因的重组供体质粒的鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组Bacmid的构建和鉴定 | 第51页 |
| ·细胞转染与重组病毒的收获 | 第51页 |
| ·二次感染 | 第51-52页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE | 第52页 |
| ·蛋白质Western blotting | 第52页 |
| ·RT-PCR检测mRNA水平 | 第52-54页 |
| ·mRNA的抽提(Trizol法) | 第52-53页 |
| ·RT-PCR | 第53-54页 |
| 4 结果与分析 | 第54-61页 |
| ·EGFP的克隆 | 第54-55页 |
| ·各种重组供体质粒的鉴定 | 第55-57页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第55页 |
| ·测序结果 | 第55-57页 |
| ·各种重组Bacmid DNA的鉴定 | 第57页 |
| ·各种重组病毒感染情况 | 第57-59页 |
| ·蛋白质检测与分析 | 第59-60页 |
| ·RT-PCR分析各种融合蛋白以及EGFP对照中mRNA水平差异 | 第60-61页 |
| 5 讨论 | 第61-63页 |
| 研究小结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录 本论文内应用的质粒图谱 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69页 |
