| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第1章 绪论 | 第8-20页 |
| ·前言 | 第8-9页 |
| ·天蓝色链霉菌形态发育与次级代谢调控研究 | 第9-13页 |
| ·基质菌丝生长 | 第9-10页 |
| ·基质菌丝向气生菌丝分化过程 | 第10页 |
| ·孢子形成 | 第10-12页 |
| ·天蓝色链霉菌的次级代谢 | 第12-13页 |
| ·σ因子研究进展 | 第13-19页 |
| ·3σ~(70)家族及σ~(54)家族的分子结构 | 第15-16页 |
| ·σ~(70)家族 | 第15-16页 |
| ·σ~(54)家族 | 第16-17页 |
| ·天蓝色链霉菌第三类选择性σ因子 | 第17-19页 |
| ·10B研究内容 | 第19-20页 |
| 第2章 材料和方法 | 第20-40页 |
| ·菌种培养 | 第20-27页 |
| ·菌种 | 第20-21页 |
| ·引物序列 | 第21-22页 |
| ·35BR_5板和R_5液体培养基 | 第22-23页 |
| ·P-buffer | 第23-24页 |
| ·YEME(Yeast extract-malt extract)培养基 | 第24页 |
| ·微量元素储存液(Trace element solution,TES) | 第24-25页 |
| ·2×YT培养基 | 第25页 |
| ·TSB培养基 | 第25页 |
| ·MSF培养基 | 第25-26页 |
| ·LB | 第26页 |
| ·孢子悬液制备 | 第26页 |
| ·S.coelicolor原生质体制备 | 第26-27页 |
| ·抗生素测定 | 第27页 |
| ·基因操作 | 第27-32页 |
| ·S.coelicolor基因组提取 | 第27-28页 |
| ·链霉菌原生质体的转化(快速小量法) | 第28页 |
| ·链霉菌的接合转导 | 第28-29页 |
| ·基因敲除和突变株筛选 | 第29-30页 |
| ·回复突变体构建 | 第30页 |
| ·主要PCR程序 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌质粒提取及其DNA片断回收 | 第32页 |
| ·天蓝色链霉菌RNA的操作 | 第32-36页 |
| ·总RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·S1核酸酶保护实验中单链反义DNA探针的制备 | 第33-34页 |
| ·Southern blot试验操作 | 第34-36页 |
| ·试剂: | 第34页 |
| ·探针标记(采用北京鼎国生物技术公司生产的随机引物法生物素标记试剂盒) | 第34页 |
| ·操作流程: | 第34-36页 |
| ·大肠杆菌中蛋白表达和纯化 | 第36-38页 |
| ·大肠杆菌中表达目的蛋白 | 第36页 |
| ·大肠杆菌中蛋白表达形式的鉴定 | 第36页 |
| ·大肠杆菌中His标签的融合表达蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·Ni~(2+)亲和Beads的准备 | 第36-37页 |
| ·挂柱及洗脱 | 第37页 |
| ·Western blot检测目的蛋白的表达 | 第37-38页 |
| ·链霉菌总蛋白抽提: | 第38-40页 |
| ·方法一:原生质体法 | 第38页 |
| ·方法二:液氮法 | 第38-40页 |
| 第3章 SigK对天蓝色链霉菌形态发育与次级代谢调控的研究 | 第40-52页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·SigK的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| ·SigK是一个潜在的σ因子 | 第41页 |
| ·sigK基因座位分析 | 第41-42页 |
| ·研究方法与内容 | 第42-45页 |
| ·质粒构建 | 第42-43页 |
| ·SigK的体外转录实验 | 第43页 |
| ·sigK缺失突变体及其sigK回复突变体构建策略 | 第43-44页 |
| ·sigK缺失株表型变化分析 | 第44页 |
| ·形态分化的变化 | 第44页 |
| ·次级代谢产物的变化 | 第44页 |
| ·sigK缺失株形态分化转录水平分析 | 第44-45页 |
| ·sigK缺失株次生代谢转录水平分析 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-51页 |
| ·SigK能够在体外起始ctc启动子的转录 | 第45-46页 |
| ·sigK的敲除 | 第46-47页 |
| ·sigK的缺失对S.coelicolor的形态分化的影响 | 第47-48页 |
| ·sigK缺失对抗生素产量影响 | 第48-49页 |
| ·sigr缺失对S.coelicolor的形态分化及次生代滴的转录水平研究 | 第49-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第4章 SigK的调控 | 第52-57页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·研究方法与内容 | 第52-53页 |
| ·SigK 调控的研究方法 | 第52-53页 |
| ·sigK的表达 | 第52页 |
| ·SigK在蛋白水平上的调控 | 第52-53页 |
| ·结果讨论 | 第53-56页 |
| ·sigK在天蓝色链霉菌整个生长过程中都有表达 | 第53页 |
| ·SigK的转录后调控 | 第53-55页 |
| ·SigK降解过程的详细研究 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第5章 结论与展望 | 第57-59页 |
| ·SigK是一个负调控的σ~(70)家族的第三类σ因子 | 第57-58页 |
| ·SigK在形态发育过程中的降解 | 第58页 |
| ·展望 | 第58-59页 |
| 缩略表 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
