| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 1 前言 | 第13-42页 |
| ·研究目的和意义 | 第13-14页 |
| ·文献综述 | 第14-42页 |
| ·类病毒的分类 | 第14-18页 |
| ·类病毒的生物特性 | 第18-19页 |
| ·类病毒的复制 | 第19-22页 |
| ·RNA 聚合、切割和连接 | 第22-24页 |
| ·类病毒的运输 | 第24-27页 |
| ·类病毒结构与功能的关系 | 第27-29页 |
| ·植物中的 RNA 沉默 | 第29-36页 |
| ·类病毒的致病性与专化的siRNAs | 第36-42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-61页 |
| ·试验材料 | 第42-43页 |
| ·质粒载体和菌株 | 第42页 |
| ·植物材料与 PSTVd 毒源 | 第42页 |
| ·酶与试剂 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第43-44页 |
| ·细菌常用培养基 | 第43页 |
| ·常用溶液的配制 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-61页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及热击转化 | 第44-45页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及电击转化 | 第45-46页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·DNA 操作 | 第47-49页 |
| ·类病毒的接种 | 第49-50页 |
| ·农杆菌介导的基因瞬时表达 | 第50页 |
| ·植物组织 RNA 的提取 | 第50-52页 |
| ·Northern Blotting | 第52-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-90页 |
| ·载体构建 | 第61-67页 |
| ·含有 PSTVd 反向插入正链单体双元载体的构建 | 第61-62页 |
| ·含有 PSTVd 正向插入负链单体双元载体的构建 | 第62-64页 |
| ·含有 PSTVd 双体双元载体的构建 | 第64-65页 |
| ·含有 PSTVd 片段（16-355）载体的构建 | 第65-66页 |
| ·含有pdsi 双元载体的构建 | 第66-67页 |
| ·PSTVd遗传变异多样性分析 | 第67-76页 |
| ·PSTVd 类病毒样品的鉴定、克隆及测序分析 | 第67-69页 |
| ·测序结果分析 | 第69-76页 |
| ·类病毒诱导的基因沉默 | 第76-88页 |
| ·类病毒沉默抑制子功能鉴定 | 第76-78页 |
| ·类病毒对 GFP 产生沉默的影响 | 第78-79页 |
| ·类病毒对沉默信号传导的影响 | 第79-82页 |
| ·类病毒载体对共注射的GFP载体中的35S启动子产生沉默的影 响 | 第82-86页 |
| ·GFP 荧光减弱是否是由于在DNA 转录成RNA 的基础上引起的 | 第86页 |
| ·类病毒对寄主体内的miRNA 途径的影响 | 第86-88页 |
| ·类病毒产生的siRNA的来源 | 第88-90页 |
| 4 讨论 | 第90-97页 |
| ·类病毒的遗传变异多样性 | 第90-91页 |
| ·类病毒是否具有沉默抑制子功能 | 第91-92页 |
| ·类病毒产生的siPSTVd大多来源于成熟的结构化的PSTVd(+) RNAs | 第92-93页 |
| ·类病毒侵染产生的siRNAs不调控miRNA途径 | 第93-94页 |
| ·RNA 沉默是否介导类病毒的进化 | 第94-95页 |
| ·RNA 沉默介导类病毒致病性 | 第95-97页 |
| 5 结论 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-121页 |
| 缩略词 | 第121-123页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文 | 第123页 |
