| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-30页 |
| ·丝状真菌蛋白分泌途径 | 第12-16页 |
| ·内质网 | 第14页 |
| ·高尔基体 | 第14页 |
| ·质膜 | 第14-15页 |
| ·液泡 | 第15页 |
| ·内吞泡 | 第15-16页 |
| ·非折叠蛋白响应 | 第16-21页 |
| ·hacl/hacA基因 | 第18-19页 |
| ·分子伴侣hsp70基因 | 第19-21页 |
| ·糖蛋白在瑞氏木霉中的糖基化类型 | 第21-24页 |
| ·糖链在糖蛋白中的作用 | 第21页 |
| ·重组人源糖蛋白的生产 | 第21-22页 |
| ·糖蛋白在丝状真菌中的糖基化途径 | 第22-24页 |
| ·丝状真菌蛋白表达系统 | 第24-29页 |
| ·丝状真菌表达载体 | 第25页 |
| ·转化DNA的整合 | 第25-28页 |
| ·丝状真菌转化方法 | 第28页 |
| ·丝状真菌转化标记的选择 | 第28-29页 |
| ·本文主要研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 内质网压力响应调节蛋白HACl和分子伴侣HSP70在瑞氏木霉中的表达 | 第30-60页 |
| ·材料和方法 | 第31-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-33页 |
| ·培养基及培养条件 | 第33页 |
| ·重组DNA技术 | 第33-34页 |
| ·引物设计及PCR扩增条件 | 第34页 |
| ·表达载体pME-hac的构建 | 第34-36页 |
| ·表达载体TptrA-hsp的构建 | 第36-37页 |
| ·双表达载体pME-hachsp的构建 | 第37页 |
| ·瑞氏木霉T47和T112的转化 | 第37-38页 |
| ·瑞氏木霉染色体DNA的提取与纯化 | 第38-39页 |
| ·转化子的PCR验证 | 第39-40页 |
| ·转化子的SouthernBlot分析 | 第40页 |
| ·转化子蛋白总量及纤维素酶活的测定 | 第40-41页 |
| ·T.reesei胞内蛋白的SDS-PAGE | 第41-43页 |
| ·T.reesei蛋白的Western blot分析 | 第43-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-59页 |
| ·表达载体pME-hac的构建 | 第45-46页 |
| ·表达载体TptrA-hsp的构建 | 第46-48页 |
| ·双表达载体pME-hachsp的构建 | 第48-50页 |
| ·T.reesei转化 | 第50-51页 |
| ·PCR方法挑选T.reesei阳性转化子 | 第51-52页 |
| ·转化子的Southern-Blot杂交分析 | 第52-54页 |
| ·T.reesei转化子胞内蛋白的SDS-PAGE分析 | 第54-55页 |
| ·转化子胞外蛋白总量及纤维素酶活的测定 | 第55-58页 |
| ·T.reesei转化子EPO Western Blot分析 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第三章 糖基化途径改造菌株的糖基化分析 | 第60-72页 |
| ·材料和方法 | 第61-66页 |
| ·实验流程 | 第61-62页 |
| ·菌株和质粒 | 第62页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第62页 |
| ·培养基及培养条件 | 第62页 |
| ·样品的收集和处理 | 第62-63页 |
| ·阴离子交换层析介质的处理及装柱 | 第63页 |
| ·葡聚糖凝胶层析介质的处理及装柱 | 第63-64页 |
| ·绘制对硝基酚标准曲线 | 第64页 |
| ·纤维二糖水解酶酶活力测定 | 第64页 |
| ·阴离子交换层析分离纤维二糖水解酶 | 第64页 |
| ·葡聚糖凝胶层析柱分离纤维二糖水解酶 | 第64-65页 |
| ·糖链的释放 | 第65页 |
| ·糖链检测方法 | 第65-66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-71页 |
| ·阴离子交换层析柱分离CBHI | 第66-67页 |
| ·葡聚糖凝胶层析柱G-100分离纤维二糖水解酶 | 第67-69页 |
| ·CBHI分离纯化及糖酰胺酶-F酶切结果 | 第69-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 全文总结 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第81页 |
