| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-38页 |
| ·古菌及超嗜热古菌Sulfolobus tokodaii的概述 | 第11-14页 |
| ·生物分类 | 第11-12页 |
| ·古菌的分类 | 第12页 |
| ·超嗜热古菌概述 | 第12页 |
| ·超嗜热古菌Sulfolobus tokodaii strain 7概述 | 第12-14页 |
| ·古菌的遗传转化系统概述 | 第14-37页 |
| ·转化方法 | 第15页 |
| ·限制/修饰系统 | 第15-16页 |
| ·选择标记 | 第16-20页 |
| ·抗生素选择标记 | 第16-19页 |
| ·营养缺陷型选择标记 | 第19-20页 |
| ·尿嘧啶选择 | 第19页 |
| ·乳糖选择 | 第19-20页 |
| ·古菌穿梭载体及其应用 | 第20-29页 |
| ·嗜盐菌、产甲烷菌穿梭载体及其应用 | 第20-23页 |
| ·超嗜热古菌穿梭载体及其应用 | 第23-29页 |
| ·超嗜热泉古菌Sulfolobus穿梭载体及其应用 | 第23-28页 |
| ·超嗜热广古菌穿梭载体及其应用 | 第28-29页 |
| ·细菌和古菌的基因敲除系统 | 第29-37页 |
| ·细菌基因敲除系统概述 | 第29-33页 |
| ·Red同源重组机制 | 第30-31页 |
| ·Red同源重组技术的发展 | 第31-33页 |
| ·古菌中常用的基因敲除方法 | 第33-35页 |
| ·嗜盐菌及甲烷菌基因敲除系统 | 第35-36页 |
| ·超嗜热古菌基因敲除系统及其应用 | 第36-37页 |
| ·本试验的立题依据和基本思路 | 第37-38页 |
| ·立题依据 | 第37页 |
| ·基本思路 | 第37-38页 |
| 第二章 Sulfolobus tokodaii lacS及pyrE基因敲除载体的构建 | 第38-53页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验材料、试剂与实验仪器 | 第38-39页 |
| ·实验方法与步骤 | 第39-44页 |
| ·基因克隆方法及步骤 | 第39-41页 |
| ·S.tokodaii lacS基因敲除载体p5EF3的构建 | 第41-42页 |
| ·S.tokodaii pyrE基因敲除载体p5PH3的构建 | 第42-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-53页 |
| ·构建S.tokodafi lacS基因敲除载体p5EF3 | 第44-48页 |
| ·构建S.tokodaii pyrE基因敲除载体p5PH3 | 第48-53页 |
| 第三章 Sulfolobus tokodaii 3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因的克隆、表达及蛋白的纯化与酶活测定 | 第53-60页 |
| ·引言 | 第53-54页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第54-55页 |
| ·实验方法与步骤 | 第55-56页 |
| ·StoHMGR基因克隆 | 第55页 |
| ·StoHMGR蛋白表达及纯化 | 第55-56页 |
| ·StoHMGR蛋白表达 | 第55页 |
| ·StoHMGR蛋白纯化 | 第55-56页 |
| ·StoHMGR酶活测定 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-59页 |
| ·StoHMGR基因的克隆 | 第56-57页 |
| ·StoHMGR蛋白表达与纯化 | 第57-58页 |
| ·StoHMGR酶活测定 | 第58-59页 |
| ·NADPH浓度标准曲线 | 第58-59页 |
| ·StoHMGR酶活测定 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 Sulfolobus tokodaii的电转化及突变体筛选 | 第60-67页 |
| ·引言 | 第60-61页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第61页 |
| ·实验方法与步骤 | 第61-62页 |
| ·不同辛伐他汀浓度对S.tokodaii生长的影响 | 第61页 |
| ·基因敲除载体的甲基化处理 | 第61-62页 |
| ·电转化S.tokodaii感受态细胞 | 第62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-65页 |
| ·不同辛伐他汀浓度对S.tokodaii生长的影响 | 第62-63页 |
| ·载体的甲基化处理 | 第63-64页 |
| ·S.tokodaii尿嘧啶营养缺陷型菌株的获得 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 第五章 总结与展望 | 第67-69页 |
| ·总结 | 第67页 |
| ·展望 | 第67-69页 |
| 附录1 本文所使用的仪器和试剂 | 第69-71页 |
| 附录2 本文所使用的Sulfolobus tokodai培养基 | 第71-72页 |
| 附录3 本文中用于PCR扩增的引物序列 | 第72-73页 |
| 附录4 PCR扩增及酶切体系 | 第73-74页 |
| 附录5 大肠杆菌化学转化的感受态细胞制备 | 第74-75页 |
| 附录6 大肠杆菌化学转化方法 | 第75-76页 |
| 附录7 菌落PCR筛选目的转化子 | 第76-77页 |
| 附录8 碱裂解法提取质粒操作步骤 | 第77-80页 |
| 附录9 重叠延伸PCR技术原理及方法 | 第80-82页 |
| 附录10 Sulfolobus tokodaii感受态细胞制备 | 第82-83页 |
| 附录11 本论文所构建的质粒(载体) | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 | 第99-100页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第100页 |
