| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-26页 |
| 1 抗体药物的发展历史 | 第11-12页 |
| 2 抗CD52 单克隆抗体的机理与应用 | 第12-15页 |
| 2.1 慢性淋巴细胞白血病(CLL) | 第12-13页 |
| 2.2 国外已上市针对慢性淋巴细胞白血病的抗CD52 抗体药物Campath(Alemtuzumab) | 第13-15页 |
| 2.3 CD52 抗原与抗CD52 抗体作用机理 | 第15页 |
| 3 生产抗体药物的动物细胞培养工艺 | 第15-22页 |
| 3.1 大规模动物细胞培养过程中的关键工艺参数的确定与控制 | 第16-20页 |
| 3.2 批次补料(Fed-batch)培养与连续灌注培养的比较 | 第20-22页 |
| 4 抗体结构异质性与质量差异 | 第22-25页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 抗CD52 抗体的结构和功能研究 | 第26-88页 |
| 1 材料与仪器 | 第28-31页 |
| 1.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 1.2 主要设备 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-48页 |
| 2.1 抗CD52 抗体N末端测序 | 第31页 |
| 2.2 SDS-PAGE法初步分析抗CD52 抗体分子量和纯度 | 第31-34页 |
| 2.3 抗CD52 抗体质谱分子量分析 | 第34-35页 |
| 2.4 抗CD52 抗体二硫键配对分析 | 第35-36页 |
| 2.5 抗CD52 抗体圆二色谱分析 | 第36-37页 |
| 2.6 等电聚焦电泳测定抗CD52 抗体等电点 | 第37-38页 |
| 2.7 抗CD52 抗体阳离子交换色谱(CEX-HPLC)电荷异质性分析 | 第38-40页 |
| 2.8 抗CD52 抗体糖型分析 | 第40-42页 |
| 2.9 抗CD52 抗体唾液酸含量分析 | 第42-44页 |
| 2.10 MC/CAR细胞的培养 | 第44页 |
| 2.11 流式细胞法检测 MC/CAR 细胞膜 CD52 抗原表达实验 | 第44-45页 |
| 2.12 间接免疫荧光法测定抗CD52 抗体与靶细胞结合活性 | 第45-46页 |
| 2.13 抗CD52 抗体CDC活性检测 | 第46-47页 |
| 2.14 抗CD52 抗体ADCC活性检测 | 第47-48页 |
| 3 实验结果 | 第48-84页 |
| 3.1 抗CD52 抗体N末端序列与理论序列一致 | 第48-54页 |
| 3.2 SDS-PAGE法分析显示抗CD52 抗体分子为典型的IgG1 结构 | 第54-57页 |
| 3.3 抗CD52 抗体分子量与理论值一致 | 第57-62页 |
| 3.4 抗CD52 抗体二硫键配对类型与理论值一致 | 第62-65页 |
| 3.5 抗CD52 抗体圆二色谱(CD)分析结果 | 第65-69页 |
| 3.6 等电聚焦电泳测定抗CD52 抗体等电点 | 第69页 |
| 3.7 抗CD52 抗体的酸碱组分含量 | 第69-71页 |
| 3.8 抗CD52 抗体的糖型组分和含量 | 第71-78页 |
| 3.9 抗CD52 抗体的唾液酸含量 | 第78页 |
| 3.10 MC/CAR细胞高表达CD52 抗原 | 第78-79页 |
| 3.11 抗CD52 抗体的靶细胞结合活性 | 第79-81页 |
| 3.12 抗CD52 抗体的CDC活性 | 第81-82页 |
| 3.13 抗CD52 抗体的ADCC活性 | 第82-84页 |
| 4 讨论与结论 | 第84-88页 |
| 第三章 使用批次补料和连续灌注培养工艺生产抗CD52 抗体的工艺和质量对比研究 | 第88-127页 |
| 1 材料和设备 | 第88-90页 |
| 1.1 实验材料 | 第88-89页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第89页 |
| 1.3 仪器设备 | 第89-90页 |
| 2 实验方法 | 第90-102页 |
| 2.1 TH-6 细胞的冻存、复苏 | 第90页 |
| 2.2 TH-6 细胞的摇瓶补料培养 | 第90-91页 |
| 2.3 TH-6 细胞的摇瓶模拟灌注培养 | 第91页 |
| 2.4 TH-6 细胞生物反应器批次补料培养 | 第91-94页 |
| 2.5 TH-6 细胞生物反应器连续灌注培养 | 第94-95页 |
| 2.6 TH-6 细胞的生长、代谢、表达分析 | 第95-97页 |
| 2.7 Protein A-HPLC法测上清液抗体浓度 | 第97-99页 |
| 2.8 抗体发酵上清液的亲和层析 | 第99-101页 |
| 2.9 批次补料培养与连续灌注培养生产抗体蛋白的对比研究 | 第101-102页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第102-121页 |
| 3.1 复苏TH-6 细胞的生长状况 | 第102-103页 |
| 3.2 摇瓶批次补料培养TH-6 细胞的生长与表达情况 | 第103-106页 |
| 3.3 摇瓶模拟灌注培养TH-6 细胞的生长与表达情况 | 第106-108页 |
| 3.4 生物反应器批次补料培养TH-6 细胞的生长与表达情况 | 第108-111页 |
| 3.5 生物反应器连续灌注培养TH-6 细胞的生长与表达情况 | 第111-114页 |
| 3.6 批次补料培养与连续灌注培养生产抗体的质量对比研究结果 | 第114-121页 |
| 4 讨论与结论 | 第121-127页 |
| 参考文献 | 第127-135页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136-138页 |
