| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 主要符号对照表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-37页 |
| 1.1 口服免疫技术 | 第17-19页 |
| 1.2 酵母表达系统的异源蛋白表达 | 第19-21页 |
| 1.3 重组酵母介导的口服免疫 | 第21-27页 |
| 1.3.1 重组酵母介导的免疫调控 | 第21-23页 |
| 1.3.2 重组酵母介导的口服疫苗 | 第23-27页 |
| 1.4 重组酵母介导口服免疫的优化策略 | 第27-31页 |
| 1.4.1 酵母菌株的优化 | 第27-29页 |
| 1.4.2 DNA质粒的优化 | 第29-30页 |
| 1.4.3 免疫佐剂的联合使用 | 第30-31页 |
| 1.5 鱼用疫苗的现状 | 第31-35页 |
| 1.5.1 渔业发展与疫苗的关系 | 第31页 |
| 1.5.2 鱼用疫苗的种类 | 第31-33页 |
| 1.5.3 鱼用口服疫苗的进展 | 第33-35页 |
| 1.6 本研究目的意义 | 第35-37页 |
| 第二章 口服重组酵母免疫系统的菌株优化 | 第37-58页 |
| 2.1 试验材料 | 第37-39页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第37-38页 |
| 2.1.2 试剂 | 第38页 |
| 2.1.3 试剂和培养基配制 | 第38页 |
| 2.1.4 引物 | 第38-39页 |
| 2.2 试验方法 | 第39-49页 |
| 2.2.1 同源臂供体DNA质粒的构建 | 第39-43页 |
| 2.2.2 同源臂供体质粒的线性化处理 | 第43页 |
| 2.2.3 G418药物浓度筛选实验 | 第43-44页 |
| 2.2.4 不同酵母基因敲除株(无耐药基因)的筛选获取 | 第44-49页 |
| 2.3 试验结果 | 第49-56页 |
| 2.3.1 同源臂供体质粒的构建 | 第49-51页 |
| 2.3.2 同源臂供体质粒的线性化处理 | 第51页 |
| 2.3.3 G418药物浓度筛选实验 | 第51-52页 |
| 2.3.4 无耐药基因的不同基因敲除型酵母菌株的筛选获取 | 第52-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-57页 |
| 2.5 小结 | 第57-58页 |
| 第三章 口服重组酵母免疫系统菌株优化效果的活体验证 | 第58-71页 |
| 3.1 试验材料 | 第59页 |
| 3.1.1 细胞株及质粒 | 第59页 |
| 3.1.2 试剂 | 第59页 |
| 3.1.3 试剂和培养基配制 | 第59页 |
| 3.2 试验方法 | 第59-64页 |
| 3.2.1 携带MSTN基因真核表达质粒的口服重组酵母免疫系统的构建 | 第59-62页 |
| 3.2.2 应用重组酵母免疫系统的口服饲喂实验 | 第62页 |
| 3.2.3 不同实验组小鼠血清中mstn抗体的鉴定及抗体效价比较 | 第62-64页 |
| 3.2.4 口服饲喂后不同实验组的肌肉形态比较 | 第64页 |
| 3.3 试验结果 | 第64-69页 |
| 3.3.1 MSTN基因真核表达质粒的构建 | 第64页 |
| 3.3.2 mstn蛋白的原核表达 | 第64-65页 |
| 3.3.3 不同实验组体重增加及肌肉形态的效果比较 | 第65-67页 |
| 3.3.4 不同实验组血清中mstn抗体的检测 | 第67-68页 |
| 3.3.5 不同实验组间抗体效价的比对 | 第68-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-70页 |
| 3.5 小结 | 第70-71页 |
| 第四章 口服重组酵母免疫系统的重组DNA优化及活体验证 | 第71-83页 |
| 4.1 试验材料 | 第72页 |
| 4.1.1 细胞株及质粒 | 第72页 |
| 4.1.2 试剂 | 第72页 |
| 4.1.3 试剂和培养基配制 | 第72页 |
| 4.1.4 引物 | 第72页 |
| 4.2 试验方法 | 第72-78页 |
| 4.2.1 优化型口服重组酵母免疫系统的构建 | 第72-76页 |
| 4.2.2重组酵母免疫系统的口服饲喂实验 | 第76-77页 |
| 4.2.3 口服饲喂后血清中mstn抗体的鉴定 | 第77-78页 |
| 4.3 试验结果 | 第78-81页 |
| 4.3.1 优化型MSTN基因真核表达质粒的构建 | 第78-79页 |
| 4.3.2 不同实验组体重增加的效果比较 | 第79页 |
| 4.3.3 不同实验组血清中mstn抗体的检测效果比较 | 第79-80页 |
| 4.3.4 不同实验组间抗体效价的比对 | 第80-81页 |
| 4.4 讨论 | 第81-82页 |
| 4.5 小结 | 第82-83页 |
| 第五章 口服酵母疫苗在鲫鱼上的应用 | 第83-96页 |
| 5.1 试验材料 | 第84-85页 |
| 5.1.1 细胞株及质粒 | 第84页 |
| 5.1.2 试剂 | 第84页 |
| 5.1.3 试剂和培养基配制 | 第84页 |
| 5.1.4 引物 | 第84-85页 |
| 5.2 试验方法 | 第85-90页 |
| 5.2.1 抗原基因的筛选和抗原性预测 | 第85页 |
| 5.2.2 真核表达载体的构建及表达验证 | 第85-86页 |
| 5.2.3 真核表达载体在真核细胞中的表达验证 | 第86-87页 |
| 5.2.4 原核表达载体的构建及目的蛋白的原核诱导表达 | 第87-88页 |
| 5.2.5 口服用酵母DNA疫苗的准备 | 第88页 |
| 5.2.6 口服饲喂鲫鱼DNA疫苗的预实验及效果验证 | 第88-90页 |
| 5.2.7 嗜水气单胞菌的攻毒实验 | 第90页 |
| 5.3 试验结果 | 第90-95页 |
| 5.3.1 抗原基因的筛选和抗原性预测 | 第90-91页 |
| 5.3.2 表达载体的构建及表达验证 | 第91页 |
| 5.3.3 真核表达载体的表达验证 | 第91-92页 |
| 5.3.4 原核表达载体的构建及目的蛋白的原核诱导表达 | 第92-93页 |
| 5.3.5 口服饲喂鲫鱼DNA疫苗的预实验及免疫反应验证 | 第93-95页 |
| 5.3.6 嗜水气单胞菌的攻毒实验 | 第95页 |
| 5.4 讨论 | 第95页 |
| 5.5 小结 | 第95-96页 |
| 第六章 结论 | 第96-97页 |
| 附录 | 第97-102页 |
| 参考文献 | 第102-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 个人简历 | 第115页 |
