| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-33页 |
| 1 核糖体失活蛋白的概念和发现历史 | 第12-13页 |
| 2 核糖体研究概况 | 第13-22页 |
| 2.1 RIPs的分类和基本特征 | 第13-14页 |
| 2.2 RIPs的酶活性 | 第14-17页 |
| 2.3 RIPs的多种功能及应用 | 第17-22页 |
| 3 三角梅及三角梅核糖体失活蛋白 | 第22-24页 |
| 3.1 三角梅概况 | 第22-23页 |
| 3.2 三角梅核糖体失活蛋白简介 | 第23-24页 |
| 4 蛋白体外表达系统 | 第24-31页 |
| 4.1 大肠杆菌表达系统 | 第24-27页 |
| 4.2 病毒表达系统 | 第27页 |
| 4.3 酵母表达系统 | 第27-31页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第31页 |
| 6 研究内容与技术路线 | 第31-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-47页 |
| 1 实验材料 | 第33-37页 |
| 1.1 载体、菌株和细胞 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第33页 |
| 1.3 主要仪器和设备 | 第33-34页 |
| 1.4 主要试剂 | 第34-37页 |
| 2 方法 | 第37-47页 |
| 2.1 三角梅Bouganin基因的克隆 | 第37页 |
| 2.2 pPIC9K-Bouganin表达载体的构建 | 第37-41页 |
| 2.3 电转化毕赤酵母GS115 | 第41-44页 |
| 2.4 Bouganin蛋白基因的诱导表达与纯化 | 第44-46页 |
| 2.5 Bouganin蛋白对肿瘤细胞的抑制作用检测 | 第46-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-67页 |
| 1 目的基因Bouganin的克隆 | 第47页 |
| 2 pPIC9K-Bouganin表达载体的构建 | 第47-53页 |
| 2.1 Bougain目的基因序列PCR扩增 | 第47-48页 |
| 2.2 pPIC9K质粒提取 | 第48-50页 |
| 2.3 pPIC9K质粒的双酶切 | 第50-51页 |
| 2.4 检测大肠杆菌pPIC9K-Bouganin重组载体 | 第51-53页 |
| 3 pPIC9K-Bouganin载体电转化进入酵母细胞 | 第53-56页 |
| 3.1 pPIC9K-Bougain重组载体线性化 | 第53-54页 |
| 3.2 电转化pPIC9K-Bougain进入酵母基因 | 第54-55页 |
| 3.3 酵母阳性重组子的检测 | 第55-56页 |
| 4 Bouganin蛋白表达与纯化 | 第56-63页 |
| 4.1 不同酵母重组子蛋白表达量检测 | 第56-59页 |
| 4.2 Bouganin重组子诱导条件优化 | 第59-61页 |
| 4.3 Bougain重组蛋白的亲和层析纯化 | 第61-63页 |
| 5 Bouganin蛋白对肿瘤细胞的抑制作用检测 | 第63-67页 |
| 第四章 讨论 | 第67-71页 |
| 1 提高重组蛋白表达量 | 第67-69页 |
| 2 优化MTT法肿瘤抑制检测 | 第69-70页 |
| 3 Bouganin蛋白抗肿瘤活性作用机理 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
