| 摘要 | 第3-9页 |
| ABSTRACT | 第9-15页 |
| 中英文缩略词表 | 第20-22页 |
| 第一章 苏拉明对糖尿病模型大鼠背根神经节卫星胶质细胞介导神经病理痛作用研究 | 第22-44页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| 材料与方法 | 第23-33页 |
| 1.1 材料 | 第23-29页 |
| 1.1.1 动物 | 第23页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第23-25页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 1.1.4 溶液配制 | 第26-29页 |
| 1.2 方法 | 第29-33页 |
| 1.2.1 1型糖尿病大鼠造模及实验分组 | 第29页 |
| 1.2.2 大鼠血糖测定 | 第29页 |
| 1.2.3 机械痛敏及热痛敏测定 | 第29-30页 |
| 1.2.4 RT-PCR | 第30-31页 |
| 1.2.5 免疫荧光双标 | 第31页 |
| 1.2.6 蛋白印迹 | 第31-33页 |
| 1.2.7 统计方法 | 第33页 |
| 结果 | 第33-41页 |
| 1.3.1 血糖 | 第33页 |
| 1.3.2 苏拉明或甘珀酸对糖尿病大鼠机械痛敏的影响 | 第33-34页 |
| 1.3.3 苏拉明或甘珀酸对糖尿病大鼠热痛敏的影响 | 第34-35页 |
| 1.3.4 苏拉明对糖尿病大鼠DRG P2X_7 mRNA表达的影响 | 第35-36页 |
| 1.3.5 大鼠DRG中卫星胶质细胞GFAP的表达 | 第36-37页 |
| 1.3.6 DRG中P2X_7与GFAP荧光双标结果 | 第37-38页 |
| 1.3.7 苏拉明对糖尿病大鼠DRG中P2X_7蛋白表达的影响 | 第38-39页 |
| 1.3.8 苏拉明或甘珀酸对糖尿病大鼠DRG中GFAP蛋白表达的影响 | 第39-40页 |
| 1.3.9 苏拉明或甘珀酸对糖尿病大鼠DRG中Cx43蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
| 讨论 | 第41-44页 |
| 第二章 橙皮苷对背根神经节P2X_4受体介导糖尿病大鼠神经病理痛作用研究 | 第44-71页 |
| 引言 | 第44-45页 |
| 材料与方法 | 第45-57页 |
| 2.1 材料 | 第45-51页 |
| 2.1.1 动物及细胞 | 第45-46页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第47-51页 |
| 2.2 方法 | 第51-57页 |
| 2.2.1 2型糖尿病模型建立 | 第51页 |
| 2.2.2 动物分组 | 第51页 |
| 2.2.3 大鼠血糖测定 | 第51页 |
| 2.2.4 大鼠行为学测定 | 第51-52页 |
| 2.2.5 RT-PCR | 第52-53页 |
| 2.2.6 免疫组织化学方法 | 第53-54页 |
| 2.2.7 免疫荧光双标 | 第54页 |
| 2.2.8 蛋白印迹 | 第54-55页 |
| 2.2.9 HEK293细胞株培养 | 第55-56页 |
| 2.2.10 HEK293细胞转染P2X_4质粒 | 第56页 |
| 2.2.11 HEK293细胞转染P2X_4质粒后转染效率的检测 | 第56页 |
| 2.2.12 全细胞膜片钳记录ATP激活电流 | 第56-57页 |
| 2.2.13 统计方法 | 第57页 |
| 结果 | 第57-68页 |
| 2.3.1 大鼠血糖的变化 | 第57-58页 |
| 2.3.2 橙皮苷对大鼠痛行为的影响 | 第58-59页 |
| 2.3.3 橙皮苷降低糖尿病大鼠DRG中P2X_4受体的mRNA表达 | 第59-60页 |
| 2.3.4 橙皮苷降低糖尿病大鼠DRG中P2X_4受体免疫反应性 | 第60-61页 |
| 2.3.5 橙皮苷降低糖尿病大鼠DRG中P2X_4受体与GFAP共表达 | 第61-62页 |
| 2.3.6 橙皮苷降低糖尿病大鼠DRG中P2X_4受体蛋白的表达 | 第62-63页 |
| 2.3.7 橙皮苷降低糖尿病大鼠DRG中GFAP蛋白的表达 | 第63-64页 |
| 2.3.8 橙皮苷对糖尿病大鼠ERK信号通路的作用 | 第64-65页 |
| 2.3.9 橙皮苷对糖尿病大鼠TNF-R1表达的影响 | 第65-66页 |
| 2.3.10 HEK293细胞转染P2X_4质粒后转染效率 | 第66-67页 |
| 2.3.11 橙皮苷抑制表达P2X_4受体的HEK293细胞的ATP激活电流 | 第67-68页 |
| 讨论 | 第68-71页 |
| 第三章 K-RAS小干扰核糖核酸对大鼠背根神经节嘌呤2X_7受体介导2型糖尿病神经病理痛的作用研究 | 第71-99页 |
| 引言 | 第71-73页 |
| 材料与方法 | 第73-82页 |
| 3.1 材料 | 第73-78页 |
| 3.1.1 动物 | 第73页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第73-74页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第74页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第74-78页 |
| 3.2 方法 | 第78-82页 |
| 3.2.1 快速预测RNA与蛋白质的相互作用 | 第78页 |
| 3.2.2 2型糖尿病模型构建 | 第78页 |
| 3.2.3 实验分组及K-ras小干扰RNA静脉注射 | 第78-79页 |
| 3.2.4 大鼠体重与血糖测定 | 第79页 |
| 3.2.5 机械痛敏与热痛敏测定 | 第79-80页 |
| 3.2.6 尾神经传导速度测定 | 第80页 |
| 3.2.7 RT-PCR检测P2X_7mRNA | 第80页 |
| 3.2.8 免疫荧光双标检测GFAP与P2X_7 | 第80页 |
| 3.2.9 蛋白印迹检测GFAP、P2X_7、TNF-α | 第80页 |
| 3.2.10 DRG急性分离方法 | 第80-81页 |
| 3.2.11 HEK293细胞共转染P2X_7质粒及K-ras小干扰RNA | 第81-82页 |
| 3.2.12 全细胞膜片钳记录 | 第82页 |
| 3.2.13 统计方法 | 第82页 |
| 结果 | 第82-96页 |
| 3.3.1 大鼠体重 | 第82-83页 |
| 3.3.2 大鼠血糖 | 第83-85页 |
| 3.3.3 行为学结果 | 第85-87页 |
| 3.3.4 尾神经传导速度 | 第87-88页 |
| 3.3.5 K-ras RNA与P2X_7受体的相互作用预测 | 第88页 |
| 3.3.6 K-ras小干扰RNA对P2X_7受体mRNA的影响 | 第88-89页 |
| 3.3.7 K-ras小干扰RNA对糖尿病模型大鼠背根神经节P2X_7受体蛋白表达 | 第89-90页 |
| 3.3.8 K-ras小干扰RNA对糖尿病大鼠背根神经节P2X_7受体与GFAP共表达的影响 | 第90-91页 |
| 3.3.9 GFAP蛋白表达变化 | 第91-92页 |
| 3.3.10 TNF-α表达变化 | 第92-93页 |
| 3.3.11 糖尿病大鼠背根神经节细胞产生的ATP电流大小 | 第93-94页 |
| 3.3.12 K-ras小干扰RNA对转染pEGFP-hP2X_7质粒的HEK293细胞ATP激活电流的影响 | 第94-96页 |
| 讨论 | 第96-99页 |
| 第四章 葛根素对初级感觉神经元P2X_3受体作用及分子机制研究 | 第99-119页 |
| 引言 | 第99-101页 |
| 材料与方法 | 第101-110页 |
| 4.1 材料 | 第101-102页 |
| 4.1.1 细胞 | 第101页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第101页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第101页 |
| 4.1.4 电生理溶液配制 | 第101-102页 |
| 4.1.5 pEGFP-C1-P2X_3受体重组质粒构建试剂 | 第102页 |
| 4.2 方法 | 第102-110页 |
| 4.2.1 同源建模与分子对接确定P2X_3受体突变点 | 第102-104页 |
| 4.2.2 P2X_3基因定点突变的PCR方法 | 第104-105页 |
| 4.2.3 野生型及突变型pEGFP-C1-P2X_3重组质粒的构建 | 第105-109页 |
| 4.2.4 HEK293细胞培养 | 第109页 |
| 4.2.5 HEK293细胞转染野生型及突变型P2X_3受体 | 第109-110页 |
| 4.2.6 HEK293细胞转染P2X_3质粒后转染效率的检测 | 第110页 |
| 4.2.7 全细胞膜片钳记录 | 第110页 |
| 4.2.8 统计方法 | 第110页 |
| 结果 | 第110-117页 |
| 4.3.1 葛根素与P2X_3受体分子对接结果 | 第110-112页 |
| 4.3.2 蛋白-配体对接评分选择P2X_3受体突变点 | 第112-113页 |
| 4.3.3 pEGFP-C1-P2X_3受体重组质粒构建结果 | 第113-115页 |
| 4.3.4 HEK293细胞转染P2X_3受体的效率 | 第115页 |
| 4.3.5 葛根素对转染野生型及突变型P2X_3受体的HEK293细胞ATP激活电流的影响 | 第115-117页 |
| 讨论 | 第117-119页 |
| 第五章 结论 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-131页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第131-132页 |
| 综述一 P2Y嘌呤受体与镇痛研究 | 第132-145页 |
| 参考文献 | 第141-145页 |
| 综述二 嘌呤2受体介导的初级感觉神经节神经元胞体与卫星胶质细胞间信息交流的研究进展 | 第145-155页 |
| 参考文献 | 第152-155页 |
