| Abstract | 第7-9页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abbreviations | 第12-14页 |
| 第一章 研究背景 | 第14-34页 |
| 一、研究历史 | 第14-18页 |
| (一) CRISPR的发现 | 第14页 |
| (二) CRISPR广范分布于原核生物并偶联编码基因 | 第14-15页 |
| (三) CRISPR/Cas是原核生物的获得性免疫系统 | 第15-16页 |
| (四) CRISPR/Cas系统的机制研究 | 第16-18页 |
| 二、CRISPR/Cas系统 | 第18-20页 |
| (一) CRISPR/Cas系统的组成 | 第18页 |
| (二) CRISPR/Cas系统的工作机制 | 第18-20页 |
| 三、CRISPR/Cas9系统 | 第20-34页 |
| (一) CRISPR/Cas9系统的介绍 | 第20-22页 |
| (二) CRISPR/Cas9系统的脱靶效应 | 第22-26页 |
| (三) CRISPR/Cas9系统的应用 | 第26-29页 |
| (四) CRISPR/Cas9系统的其他发展 | 第29-34页 |
| 第二章 双sgRNA策略便利于CRISPR/Cas9系统介导的小鼠基因组改造和模型建立 | 第34-72页 |
| 一、前言 | 第34-36页 |
| 二、材料与方法和仪器设备 | 第36-48页 |
| 实验动物 | 第36页 |
| 细胞培养与转染 | 第36页 |
| 质粒构建 | 第36-41页 |
| Cas9 mRNA体外转录 | 第41页 |
| sgRNA体外转录 | 第41-42页 |
| T7EI酶切分析 | 第42-43页 |
| 单细胞期胚胎显微注射Cas9/sgRNA | 第43-44页 |
| 脱靶效应的分析 | 第44-46页 |
| 血生化分析 | 第46页 |
| 仪器设备 | 第46-48页 |
| 三、结果分析 | 第48-72页 |
| (一) 双sgRNA能加强CRISPR/Cas9对定点敲入的EGFP基因的突变作用 | 第48-50页 |
| (二) 双sgRNA能加强CRISPR/Cas9对小鼠内源性ApoE基因的突变作用 | 第50-57页 |
| (三) CRISPR/Cas9能在小鼠中产生位置依赖的脱靶效应 | 第57-62页 |
| (四) CRISPR/Cas9介导的基因靶向编辑与脱靶突变都可以进行跨代遗传 | 第62-68页 |
| (五) 双sgRNA策略便利于CRISPR/Cas9系统介导免疫基因的修饰和免疫缺陷小鼠的构建 | 第68-72页 |
| 第三章 利用双sgRNA策略进行CRISPR/Cas9介导的山羊MSTN基因的编辑 | 第72-102页 |
| 一、前言 | 第72-74页 |
| 二、材料与方法和仪器设备 | 第74-86页 |
| 实验动物 | 第74页 |
| 细胞培养与转染 | 第74页 |
| 质粒构建 | 第74-77页 |
| Cas9 mRNA体外转录 | 第77-78页 |
| sgRNA体外转录 | 第78-79页 |
| T7EI酶切分析 | 第79-80页 |
| 单细胞期胚胎显微注射Cas9/sgRNA | 第80页 |
| 脱靶效应的分析 | 第80-81页 |
| 基因型鉴定 | 第81页 |
| H&E染色 | 第81页 |
| 透射电镜分析 | 第81-82页 |
| 定量PCR分析 | 第82页 |
| 蛋白质印迹分析 | 第82页 |
| 仪器设备 | 第82-86页 |
| 三、结果分析 | 第86-102页 |
| (一) 在山羊成纤维细胞上检测MSTN sgRNA靶向切割的效率 | 第86-88页 |
| (二) CRISPR/Cas9系统介导的MSTN基因编辑山羊 | 第88-90页 |
| (三) CRISPR/Cas9介导的MSTN突变在各组织中的分布 | 第90-91页 |
| (四) CRISPR/Cas9在山羊中产生脱靶效应 | 第91-94页 |
| (五) CRISPR/Cas9介导的MSTN基因突变能增加山羊的体重 | 第94-96页 |
| (六) 在存活山羊肌肉中检测CRISPR/Cas9介导的MSTN基因编辑 | 第96-97页 |
| (七) CRISPR/Cas9介导的MSTN基因编辑山羊的组织学分析 | 第97-98页 |
| (八) MSTN基因敲除山羊肌肉组织中MSTN表达分析 | 第98页 |
| (九) 敲除基因的生殖传递 | 第98-102页 |
| 论文结论 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-116页 |
| 致谢 | 第116-118页 |
| 发表文章 | 第118-121页 |
