| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词 | 第18-19页 |
| 第一章 绪言 | 第19-41页 |
| 1.1 铝毒对植物的危害 | 第19-20页 |
| 1.2 植物适应铝毒的生理机理 | 第20-24页 |
| 1.2.1 外部排斥机制 | 第20-23页 |
| 1.2.2 内部耐受机制 | 第23-24页 |
| 1.3 植物适应铝毒的分子机制 | 第24-25页 |
| 1.3.1 铝诱导抗性基因的表达 | 第24-25页 |
| 1.3.2 铝诱导逆境蛋白的表达 | 第25页 |
| 1.4 质膜H~+-ATPase (PM H~+-ATPase)的研究进展 | 第25-30页 |
| 1.4.1 H~+-ATPase的结构 | 第25-26页 |
| 1.4.2 质膜H~+-ATPase的生理功能 | 第26-27页 |
| 1.4.3 逆境胁迫对质膜H~+-ATPase的影响 | 第27-28页 |
| 1.4.4 质膜H~+-ATPase的活性和表达的调控 | 第28-29页 |
| 1.4.5 质膜H~+-ATPase活性的调控及其与柠檬酸分泌的调节有关 | 第29-30页 |
| 1.5 14-3-3蛋白的研究进展 | 第30-33页 |
| 1.5.1 14-3-3蛋白的结构 | 第30页 |
| 1.5.2 14-3-3蛋白的功能 | 第30-33页 |
| 1.6 植物吸收硝态氮的研究进展 | 第33-36页 |
| 1.6.1 植物吸收硝态氮的机制 | 第34页 |
| 1.6.2 氮素吸收与质膜H~+-ATPase的关系 | 第34-36页 |
| 1.7 过氧化物酶POD的研究进展 | 第36-40页 |
| 1.7.1 逆境胁迫与活性氧关系 | 第36-37页 |
| 1.7.2 活性氧与质膜H~+-ATPase的关系 | 第37页 |
| 1.7.3 POD分子结构特点 | 第37页 |
| 1.7.4 POD分子的功能 | 第37-40页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第40-41页 |
| 第二章 植物表达载体的构建与转基因植物的鉴定 | 第41-50页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第42-46页 |
| 2.1.1 植物材料培养 | 第42页 |
| 2.1.2 菌株及相关载体与材料 | 第42页 |
| 2.1.3 拟南芥RNA提取和cDNA的获取 | 第42-43页 |
| 2.1.4 POD入门克隆载体pENTR-2B-POD和植物表达载体pK2-35S-POD的构建 | 第43-44页 |
| 2.1.5 烟草的遗传转化以及POD转基因烟草的培养与筛选 | 第44页 |
| 2.1.6 烟草基因组提取 | 第44-45页 |
| 2.1.7 POD烟草RNA的提取以及RT-PCR分析 | 第45页 |
| 2.1.8 转基因烟草POD的蛋白水平检测(Western-Blotting) | 第45-46页 |
| 2.1.9 过表达POD转基因烟草POD活性的检测 | 第46页 |
| 2.1.10 转基因烟草的大量培养 | 第46页 |
| 2.1.11 数据统计分析 | 第46页 |
| 2.2 结果与分析 | 第46-48页 |
| 2.2.1 POD过表达转基因烟草的鉴定及POD活性的测定 | 第47-48页 |
| 2.3 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 在烟草中过量表达拟南芥POD对铝胁迫抗性的影响 | 第50-64页 |
| 3.1 材料与方法 | 第50-54页 |
| 3.1.1 植物材料培养方法 | 第50-51页 |
| 3.1.2 烟草处理和转基因烟草根相对生长量的测定 | 第51页 |
| 3.1.3 烟草根中H_2O_2、可溶性蛋白和MDA含量的测定 | 第51-52页 |
| 3.1.4 H_2O_2荧光共聚焦测定 | 第52页 |
| 3.1.5 烟草质膜H~+-ATPase活性的测定 | 第52页 |
| 3.1.6 柠檬酸分泌量的测定 | 第52-53页 |
| 3.1.7 烟草根尖H泵活性的测定 | 第53页 |
| 3.1.8 Western Blot和免疫共沉淀(CO-IP) | 第53-54页 |
| 3.1.9 过表达POD转基因烟草在酸性土壤中生长情况分析 | 第54页 |
| 3.1.10 数据统计的显著性分析 | 第54页 |
| 3.2 结果与分析 | 第54-61页 |
| 3.2.1 不同铝浓度处理下POD转基因植株根相对生长量 | 第54-55页 |
| 3.2.2 不同浓度铝胁迫下POD转基因植株H_2O_2、可溶性蛋白和MDA含量及H_2O_2荧光染色图 | 第55-57页 |
| 3.2.3 不同浓度铝处理下POD转基因质膜H~+-ATPase活性和柠檬酸分泌的测定 | 第57-58页 |
| 3.2.4 不同浓度铝胁迫对转基因烟草植株氢泵活性和质膜H~+-ATPase和14-3-3蛋白互作的影响 | 第58-60页 |
| 3.2.5 WT和转基因烟草在酸性土壤上植物的生长状况及株株高、叶片数比较 | 第60-61页 |
| 3.3 讨论 | 第61-64页 |
| 第四章 铝胁迫下POD对烟草硝态氮吸收的调控 | 第64-71页 |
| 4.1 材料与方法 | 第64-65页 |
| 4.1.1 烟草的培养 | 第64页 |
| 4.1.2 烟草硝态氮吸收的测定 | 第64-65页 |
| 4.1.3 质膜H~+-ATPase活性和氢泵活性的的测定 | 第65页 |
| 4.1.4 Western Blot和免疫共沉淀(CO-IP)检测质膜H+-ATPase磷酸化水平和14-3-3蛋白表达水平 | 第65页 |
| 4.1.5 数据处理 | 第65页 |
| 4.2 结果与分析 | 第65-68页 |
| 4.2.1 铝胁迫1d和4d对POD过表达植株硝态氮吸收量及氢泵活性的影响 | 第65-67页 |
| 4.2.2 铝胁迫对POD过表达植株H泵活性、H~+-ATPase活性、磷酸化水平及其与14-3-3蛋白互作的影响 | 第67-68页 |
| 4.3 讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 铝胁迫下质膜H~+-ATPase和14-3-3对烟草硝态氮吸收的调控 | 第71-81页 |
| 5.1 材料与方法 | 第71-73页 |
| 5.1.1 烟草的培养 | 第71页 |
| 5.1.2 表达谱分析 | 第71-72页 |
| 5.1.3 烟草硝态氮吸收的测定 | 第72-73页 |
| 5.1.4 质膜H~+-ATPase活性和氢泵活性的的测定 | 第73页 |
| 5.1.5 Western Blot和免疫共沉淀(CO-IP)检测质膜H~+-ATPase磷酸化水平和14-3-3蛋白表达水平 | 第73页 |
| 5.1.6 数据处理 | 第73页 |
| 5.2 结果与分析 | 第73-79页 |
| 5.2.1 硝态氮营养条件下200μmol铝胁迫对烟草叶片中14-3-3 基因、PMA基因转录水平的影响 | 第73-74页 |
| 5.2.2 铝胁迫1d和4d对质膜H~+-ATPase过表达植株和抑制表达植株硝态氮吸收量的影响 | 第74-75页 |
| 5.2.3 铝胁迫对质膜H~+-ATPase过表达植株和抑制表达植株H~+-ATPase活性、氢泵活性及质膜H+-ATPase磷酸化水平及其与14-3-3蛋白互作的影响 | 第75-77页 |
| 5.2.4 铝胁迫1d和4d对14-3-3过表达植株和抑制表达植株硝态氮吸收量的影响 | 第77-78页 |
| 5.2.5 铝胁迫对14-3-3过表达植株和抑制表达植株H~+-ATPase活性、氢泵活性和磷酸化水平及其与14-3-3蛋白互作的影响 | 第78-79页 |
| 5.3 讨论 | 第79-81页 |
| 第六章 总结与展望 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-101页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表的论文 | 第101页 |
