| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-31页 |
| 1.1 核盘菌 | 第14-15页 |
| 1.2 二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)菌核净 | 第15-16页 |
| 1.3 核盘菌对苯并咪唑类及DCF类杀菌剂抗药性研究进展 | 第16-20页 |
| 1.3.1 核盘菌对苯并咪唑类杀菌剂的抗性 | 第16-17页 |
| 1.3.2 核盘菌对DCFs的抗性 | 第17页 |
| 1.3.3 核盘菌对苯并咪唑类杀菌剂的抗性机制 | 第17-19页 |
| 1.3.4 核盘菌对DCFs的抗性机制 | 第19-20页 |
| 1.4 双组份信号传导系统与MAPK级联通路 | 第20-25页 |
| 1.4.1 双组份信号传导系统 | 第20-22页 |
| 1.4.2 丝状植物病原真菌的双组份信号传导系统 | 第22-24页 |
| 1.4.3 MAPK级联通路 | 第24-25页 |
| 1.5 根癌农杆菌介导真菌遗传转化 | 第25-27页 |
| 1.6 RNA干扰(RNAi)技术 | 第27-29页 |
| 1.6.1 RNAi作用机理 | 第28页 |
| 1.6.2 RNAi介导真菌基因功能的研究 | 第28-29页 |
| 1.7 立题依据与研究意义 | 第29-30页 |
| 1.8 技术路线 | 第30-31页 |
| 第2章 菌核净抗性遗传稳定性及室内诱导抗性突变体冷藏后的生物学特性 | 第31-40页 |
| 2.1 材料和方法 | 第31-34页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第31-32页 |
| 2.1.2 药剂 | 第32页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第32页 |
| 2.1.4 供试菌株活化 | 第32-33页 |
| 2.1.5 药液配制 | 第33页 |
| 2.1.6 菌核净抗性遗传稳定性测定 | 第33页 |
| 2.1.7 菌核净室内诱导抗性突变体冷藏后对其它药剂的敏感性测定 | 第33页 |
| 2.1.8 菌核净室内诱导抗性突变体冷藏后产核能力、生长速率及致病性测定 | 第33-34页 |
| 2.1.9 菌核净室内诱导抗性突变体冷藏后渗透压敏感性测定 | 第34页 |
| 2.1.10 数据分析 | 第34页 |
| 2.2 结果与分析 | 第34-38页 |
| 2.2.1 菌核净抗性的遗传稳定性 | 第34-35页 |
| 2.2.2 菌核净室内诱导抗性突变体冷藏后对其它药剂的敏感性 | 第35-36页 |
| 2.2.3 菌核净室内诱导抗性突变体冷藏后产核、生长速率及致病性 | 第36-37页 |
| 2.2.4 菌核净室内诱导抗性突变体冷藏后渗透压敏感性 | 第37-38页 |
| 2.3 讨论 | 第38-40页 |
| 第3章 核盘菌对菌核净抗性生化机制研究 | 第40-48页 |
| 3.1 材料和方法 | 第40-43页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第40页 |
| 3.1.2 药剂及试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第41页 |
| 3.1.4 菌核净抗性与敏感菌株的草酸含量测定 | 第41页 |
| 3.1.5 菌核净抗性与敏感菌株菌丝甘油含量测定 | 第41-42页 |
| 3.1.6 菌核净抗性与敏感菌株菌丝细胞膜通透性测定 | 第42页 |
| 3.1.7 菌核净抗性与敏感菌株POD和PPO活性测定 | 第42-43页 |
| 3.1.8 数据分析 | 第43页 |
| 3.2 结果与分析 | 第43-45页 |
| 3.2.1 菌核净抗性与敏感菌株的草酸含量 | 第43页 |
| 3.2.2 菌核净抗性与敏感菌株菌丝甘油含量 | 第43-44页 |
| 3.2.3 菌核净抗性与敏感菌株菌丝细胞膜通透性 | 第44-45页 |
| 3.2.4 菌核净抗性与敏感菌株的POD和PPO酶活性 | 第45页 |
| 3.3 讨论 | 第45-48页 |
| 第4章 核盘菌双组份信号传导及MAPK级联相关基因克隆 | 第48-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第48-56页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第48-49页 |
| 4.1.2 试剂 | 第49页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第49-50页 |
| 4.1.4 引物设计 | 第50页 |
| 4.1.5 核盘菌基因组DNA、总RNA提取及第一链cDNA合成 | 第50-53页 |
| 4.1.6 PCR(Polymerase Chain Reaction)扩增 | 第53-54页 |
| 4.1.7 割胶回收 | 第54-55页 |
| 4.1.8 连接 | 第55页 |
| 4.1.9 大肠杆菌热击转化 | 第55-56页 |
| 4.1.10 数据分析 | 第56页 |
| 4.2 结果与分析 | 第56-60页 |
| 4.2.1 核盘菌双组份信号传导及MAPK级联相关基因序列分析 | 第56-59页 |
| 4.2.2 Sshk基因相对表达量分析 | 第59-60页 |
| 4.3 讨论 | 第60-62页 |
| 第5章 核盘菌Sshk转录水平对菌核净抗性水平的影响研究 | 第62-86页 |
| 5.1 材料和方法 | 第62-72页 |
| 5.1.1 供试菌株 | 第62页 |
| 5.1.2 供试质粒与载体 | 第62-63页 |
| 5.1.3 试剂 | 第63页 |
| 5.1.4 仪器设备 | 第63页 |
| 5.1.5 引物设计 | 第63-64页 |
| 5.1.6 核盘菌基因组DNA、总RNA提取及第一链cDNA合成 | 第64页 |
| 5.1.7 质粒提取、双酶切和割胶回收 | 第64-66页 |
| 5.1.8 Sshk基因载体构建 | 第66-69页 |
| 5.1.9 重组质粒热击转化及电击转化 | 第69页 |
| 5.1.10 农杆菌重组质粒鉴定 | 第69-70页 |
| 5.1.11 农杆菌介导转化核盘菌 | 第70-71页 |
| 5.1.12 转化子验证 | 第71页 |
| 5.1.13 转化子对菌核净敏感性测定 | 第71页 |
| 5.1.14 转化子生长速率及产核能力测定 | 第71页 |
| 5.1.15 转化子致病力测定 | 第71页 |
| 5.1.16 转化子对渗透压敏感性及对H_2O_2的氧化应激测定 | 第71-72页 |
| 5.1.17 转化子细胞壁及细胞膜完整性测定 | 第72页 |
| 5.1.18 转化子对不同温度敏感性测定 | 第72页 |
| 5.2 结果与分析 | 第72-83页 |
| 5.2.1 Sshk基因载体构建 | 第72-73页 |
| 5.2.2 农杆菌重组质粒鉴定 | 第73-74页 |
| 5.2.3 转化子验证 | 第74-75页 |
| 5.2.4 转化子对菌核净的敏感性 | 第75-76页 |
| 5.2.5 转化子产核能力及生长速率 | 第76-77页 |
| 5.2.6 转化子的致病力 | 第77-78页 |
| 5.2.7 转化子对渗透压敏感性 | 第78-79页 |
| 5.2.8 转化子对H_2O_2的氧化应激反应 | 第79-80页 |
| 5.2.9 转化子的细胞壁完整性 | 第80-81页 |
| 5.2.10 转化子的细胞膜完整性 | 第81-82页 |
| 5.2.11 转化子对不同温度敏感性 | 第82-83页 |
| 5.3 讨论 | 第83-86页 |
| 第6章 总结与展望 | 第86-88页 |
| 6.1 总结 | 第86页 |
| 6.2 创新点 | 第86页 |
| 6.3 展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-109页 |
| 附录Ⅰ 常用培养基及试剂配制 | 第109-114页 |
| 1.1 常用培养基配制 | 第109-110页 |
| 1.2 常用抗生素配制 | 第110-111页 |
| 1.3 常用试剂配制 | 第111-112页 |
| 1.4 感受态细胞制备 | 第112-114页 |
| 1.4.1 E.coliDH5α感受态细胞制备 | 第112页 |
| 1.4.2 农杆菌EHA105感受态细胞制备 | 第112-114页 |
| 附录Ⅱ 攻读博士学位期间发表论文 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
