| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 课题来源 | 第10页 |
| 1.2 课题研究的背景和目的意义 | 第10-11页 |
| 1.3 黑曲霉的研究现状及应用 | 第11-14页 |
| 1.3.1 黑曲霉的简介 | 第11页 |
| 1.3.2 黑曲霉发酵工程的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.3.3 黑曲霉组学的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 小G蛋白家族 | 第14-17页 |
| 1.4.1 小G蛋白家族在真菌中的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4.2 Ras在真菌中的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5 基因过表达的国内外研究现状 | 第17-18页 |
| 1.6 课题主要研究内容及技术路线 | 第18-20页 |
| 第2章 实验材料及方法 | 第20-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 实验所用到的菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 实验所用到的培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验所用的引物 | 第22页 |
| 2.1.5 实验所用到的酶与试剂盒 | 第22-23页 |
| 2.1.6 实验所用到的仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 黑曲霉ras基因编码区序列的克隆和鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.2 黑曲霉ras基因过表达质粒的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.3 黑曲霉CGMCC 3.316原生质体的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.4 PEG介导的黑曲霉原生质体转化 | 第28页 |
| 2.2.5 转化子的筛选与验证 | 第28-29页 |
| 2.2.6 实时定量PCR检测ras基因表达量 | 第29-30页 |
| 2.2.7 Western Blotting检测Ras蛋白表达量 | 第30-31页 |
| 2.2.8 转化子生长速度测定 | 第31-32页 |
| 2.2.9 转化子产孢情况 | 第32页 |
| 2.2.10 转化子生物量测定 | 第32页 |
| 2.2.11 柠檬酸酸度测定 | 第32页 |
| 2.2.12 转化子纤维素总酶活测定 | 第32-34页 |
| 第3章 重组过表达质粒的构建 | 第34-39页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 黑曲霉ras基因编码区序列的克隆和鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3 重组过表达质粒的构建 | 第35-38页 |
| 3.3.1 重组过表达质粒pCAMBIA 1301:ras的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.2 重组过表达质粒pBARGPE1:ras的构建 | 第36-38页 |
| 3.4 本章小结 | 第38-39页 |
| 第4章 黑曲霉原生质体转化及转化子的筛选 | 第39-44页 |
| 4.1 引言 | 第39页 |
| 4.2 Hygromycin B对黑曲霉CGMCC 3.316菌株最小抑制浓度确定 | 第39-40页 |
| 4.3 黑曲霉原生质体的制备 | 第40-41页 |
| 4.3.1 菌丝球培养时间对原生质体制备的影响 | 第40页 |
| 4.3.2 酶解时间对原生质体制备的影响 | 第40-41页 |
| 4.4 PEG介导的黑曲霉原生质体转化 | 第41页 |
| 4.5 转化子的分子鉴定及其稳定性验证 | 第41-43页 |
| 4.6 本章小结 | 第43-44页 |
| 第5章 ras基因过表达转化子生物学特性的研究 | 第44-50页 |
| 5.1 引言 | 第44页 |
| 5.2 实时定量PCR检测过表达效率 | 第44-45页 |
| 5.3 Western Blotting实验检测Ras蛋白表达量 | 第45页 |
| 5.4 转化子生长速度的测定 | 第45-46页 |
| 5.5 转化子产孢状况的观察 | 第46页 |
| 5.6 转化子生物量的测定 | 第46-47页 |
| 5.7 柠檬酸酸度的测定 | 第47-48页 |
| 5.8 纤维素酶酶活的测定 | 第48-49页 |
| 5.8.1 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第48页 |
| 5.8.2 纤维素酶总酶活的测定 | 第48-49页 |
| 5.9 本章小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
