| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-30页 |
| 1.1 研究背景及意义 | 第12-22页 |
| 1.1.1 血小板止血的机理 | 第12-14页 |
| 1.1.2 止血过程中的相关分子 | 第14-19页 |
| 1.1.3 ADAMTS13相关疾病 | 第19-22页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第22-27页 |
| 1.2.1 ADAMTS13构象激活的研究进展 | 第22-25页 |
| 1.2.2 二价金属离子调控ADAMTS13活性的研究进展 | 第25-27页 |
| 1.2.3 AFM在生物学领域的应用 | 第27页 |
| 1.3 科学问题的提出与论文研究的主要内容 | 第27-30页 |
| 1.3.1 科学问题的提出 | 第27-28页 |
| 1.3.2 论文研究的主要内容 | 第28页 |
| 1.3.3 论文的结构安排 | 第28-30页 |
| 第二章 WT-/GOF-ADAMTS13蛋白的表达纯化 | 第30-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-34页 |
| 2.1.1 细胞与质粒 | 第30-31页 |
| 2.1.2 试剂与耗材 | 第31-32页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第32页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第32-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-46页 |
| 2.2.1 ADAMTS13位点突变PCR实验 | 第34-36页 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 | 第36-37页 |
| 2.2.3 质粒的转化及克隆 | 第37页 |
| 2.2.4 质粒抽提 | 第37-38页 |
| 2.2.5 HindⅢ,XhoI双酶切鉴定 | 第38页 |
| 2.2.6 293 T细胞培养 | 第38-40页 |
| 2.2.7 脂质体转染获得稳定表达WT-/GOF-ADAMTS13的细胞株 | 第40页 |
| 2.2.8 WT-/GOF-ADAMTS13蛋白纯化前处理 | 第40-41页 |
| 2.2.9 WT-/GOF-ADAMTS13蛋白亲和层析纯化 | 第41页 |
| 2.2.10 分子筛纯化 | 第41-42页 |
| 2.2.11 SDS-PAGE鉴定WT-/GOF-ADAMTS13蛋白 | 第42-43页 |
| 2.2.12 WesternBlot鉴定WT-/GOF-ADAMTS13蛋白特异性 | 第43-44页 |
| 2.2.13 BCA定量WT-/GOF-ADAMTS13蛋白浓度 | 第44页 |
| 2.2.14 热噪声法校准AFM探针弹簧系数 | 第44-45页 |
| 2.2.15 AFM黏附实验 | 第45-46页 |
| 2.3 实验结果 | 第46-54页 |
| 2.3.1 GOF-ADAMTS13质粒构建结果 | 第46-48页 |
| 2.3.2 WT-/GOF-ADAMTS13纯化结果 | 第48-52页 |
| 2.3.3 WT-/GOF-ADAMTS13蛋白定量 | 第52页 |
| 2.3.4 WT-/GOF-ADAMTS13蛋白生物学功能鉴定 | 第52-54页 |
| 2.4 讨论与总结 | 第54-56页 |
| 第三章 AFM扫描揭示ADAMTS13构象多态性 | 第56-70页 |
| 3.1 实验材料 | 第56-58页 |
| 3.1.1 实验分子 | 第56页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第56页 |
| 3.1.3 仪器与软件 | 第56-58页 |
| 3.2 实验方法 | 第58页 |
| 3.2.1 AFM扫描样品制备 | 第58页 |
| 3.2.2 AFM扫描实验 | 第58页 |
| 3.3 实验结果 | 第58-66页 |
| 3.3.1 AFM蛋白成像分析 | 第58-60页 |
| 3.3.2 纯化的ADAMTS13分子构象处于正确折叠状态 | 第60-61页 |
| 3.3.3 ADAMTS13存在多种构象状态 | 第61-64页 |
| 3.3.4 低pH诱导ADAMTS13构象更加开放 | 第64-66页 |
| 3.4 讨论与总结 | 第66-70页 |
| 第四章 AFM扫描揭示二价金属离子调控ADAMTS13构象 | 第70-81页 |
| 4.1 实验材料 | 第70页 |
| 4.1.1 实验分子 | 第70页 |
| 4.1.2 试剂与耗材 | 第70页 |
| 4.1.3 仪器与软件 | 第70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-71页 |
| 4.2.1 AFM扫描样品制备 | 第70页 |
| 4.2.2 AFM扫描实验 | 第70-71页 |
| 4.3 实验结果 | 第71-78页 |
| 4.3.1 ADAMTS13的构象稳定是二价金属离子依赖的 | 第71-74页 |
| 4.3.2 ADAMTS13构象稳定性受Ca2+、Mg2+调控 | 第74-78页 |
| 4.4 讨论与总结 | 第78-81页 |
| 总结与展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 附录：缩写与符号 | 第88-89页 |
| 攻读硕士期间取得的研究成果 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 附件 | 第91页 |
