| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一部分: 对OsEMF2b参与水稻花发育调控途径的研究 | 第12-47页 |
| 一、文献综述 | 第12-18页 |
| 1. 水稻花发育相关基因 | 第12-13页 |
| 2. 表观遗传学 | 第13-15页 |
| 2.1 表观遗传学概念及主要内容 | 第13-15页 |
| 3. 酵母双杂交 | 第15页 |
| 4. OsEMF2b基因的研究现状 | 第15-17页 |
| 5. 基因CHD729的研究现状 | 第17页 |
| 6. 实验目的及意义 | 第17-18页 |
| 二、材料与方法 | 第18-32页 |
| 1. 实验材料 | 第18-20页 |
| 1.1 供试材料 | 第18-19页 |
| 1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 1.3 缓冲液 | 第19-20页 |
| 2. 实验方法 | 第20-32页 |
| 2.1 CTAB法提取DNA | 第20页 |
| 2.2 OsEMF2b分子鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2.2 PCR扩增 | 第21页 |
| 2.3 芯片分析 | 第21-22页 |
| 2.4 荧光定量PCR | 第22页 |
| 2.5 DNA亚硫酸氢钠修饰 | 第22-26页 |
| 2.5.1 PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.5.2 载体链接 | 第24页 |
| 2.5.3 连接产物转化 | 第24-25页 |
| 2.5.4 蓝白斑筛选 | 第25页 |
| 2.5.5 质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.6 总RNA的提取和检测 | 第26页 |
| 2.7 RNA反转录 | 第26页 |
| 2.8 E.coli DH5α感受态的制备 | 第26-27页 |
| 2.9 AD-CHR729、 BD-OsEMF2b载体构建 | 第27-31页 |
| 2.9.1 AD、BD载体菌株活化 | 第27页 |
| 2.9.2 AD、BD载体质粒提取 | 第27-28页 |
| 2.9.3 扩增基因CHR729、 OsEMF2b基因 | 第28页 |
| 2.9.4 胶回收 | 第28-29页 |
| 2.9.5 双酶切 | 第29页 |
| 2.9.6 连接 | 第29-30页 |
| 2.9.7 E.coil DH 5α转化 | 第30页 |
| 2.9.8 涂板 | 第30页 |
| 2.9.9 挑斑 | 第30页 |
| 2.9.10 菌落PCR | 第30-31页 |
| 2.9.11 融合表达载体的鉴定 | 第31页 |
| 2.10 酵母双杂交 | 第31-32页 |
| 2.10.1 酵母感受态的制备 | 第31-32页 |
| 2.10.2 LiAC介导的酵母小规模转化 | 第32页 |
| 2.10.3 共转化 | 第32页 |
| 三、结果与分析 | 第32-42页 |
| 1 .OsEMF2b的表型鉴定 | 第32-35页 |
| 2. 筛选受OsEMF2b调控的花器官基因 | 第35-36页 |
| 3. 重亚硫酸盐测序结果 | 第36-38页 |
| 4. CHR729的表达量变化 | 第38-39页 |
| 5. 酵母双杂交 | 第39-42页 |
| 四、讨论与后续安排 | 第42-47页 |
| 1. OsEMF2b突变体的表型 | 第42-43页 |
| 2. OsEMF2b主要调控的花器官基因 | 第43页 |
| 3. OsEMF2b的调控途径 | 第43-46页 |
| 4. OsEMF2b的互作蛋白 | 第46-47页 |
| 第二部分 DNA甲基化对水稻非印记基因的表达调控分析 | 第47-59页 |
| 一、文献综述 | 第47-50页 |
| 1. 胚乳的形成 | 第47页 |
| 2. 水稻胚乳的表观遗传学研究进展 | 第47-48页 |
| 3. 印记基因 | 第48-49页 |
| 3.1 印记基因的分子机制 | 第48-49页 |
| 3.1.1 DNA甲基化模式 | 第48-49页 |
| 3.1.2 表达竞争模式 | 第49页 |
| 3.1.3 绝缘子模式 | 第49页 |
| 4. DNA甲基化抑制剂—5-azadC | 第49页 |
| 5. 本实验的目的及意义 | 第49-50页 |
| 二、实验材料及实验方法 | 第50-51页 |
| 1 材料和方法 | 第50-51页 |
| 三、实验结果及分析 | 第51-56页 |
| 1. 基因的胚乳特异性鉴定 | 第51-52页 |
| 1.1 目标基因筛选 | 第51页 |
| 1.2 表达部位特异性分析 | 第51-52页 |
| 2. 非印记基因的筛选 | 第52-53页 |
| 3. 去DNA甲基化处理结果分析 | 第53-54页 |
| 3.1 DNA甲基化与杂种优势有关 | 第53-54页 |
| 3.2 DNA甲基化对胚乳特异基因表达的改变 | 第54页 |
| 4. 非印记位点变化 | 第54-56页 |
| 4.1 SNPs的表达不变 | 第54-55页 |
| 4.2 SNPs的表达改变 | 第55-56页 |
| 四、讨论与分析 | 第56-59页 |
| 1. DNA甲基化调控胚乳特异性基因并抑制幼苗基因活性 | 第56-57页 |
| 2. DNA甲基化与组蛋白修饰和印记表达相关 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
