| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-23页 |
| 第一章 布鲁氏菌的研究进展 | 第13-23页 |
| 1.1 布鲁氏菌感染机制 | 第13-15页 |
| 1.1.1 布鲁氏菌主要感染的宿主细胞 | 第13-14页 |
| 1.1.2 布鲁氏菌的生物学特征 | 第14-15页 |
| 1.1.3 布鲁氏菌的胞内运输 | 第15页 |
| 1.2 布鲁氏菌的相关毒力因子 | 第15-16页 |
| 1.2.1 布鲁氏菌脂多糖 | 第15-16页 |
| 1.2.2 布鲁氏菌外膜蛋白 | 第16页 |
| 1.3 布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统 | 第16-18页 |
| 1.3.1 T4SS的结构 | 第17页 |
| 1.3.2 T4SS的调控机制 | 第17页 |
| 1.3.3 T4SS的效应分子 | 第17-18页 |
| 1.4 布鲁氏菌感染与内质网应激 | 第18-21页 |
| 1.4.1 ERS与未折叠蛋白反应 | 第19-20页 |
| 1.4.2 ERS介导的细胞凋亡 | 第20页 |
| 1.4.3 ERS与布鲁氏菌感染 | 第20-21页 |
| 1.5 布鲁氏菌感染与胎盘滋养层细胞 | 第21页 |
| 1.6 布鲁氏菌的疫苗防控 | 第21-22页 |
| 1.7 本研究目的及内容 | 第22-23页 |
| 试验研究 | 第23-52页 |
| 第二章 布鲁氏菌VceC缺失菌株的构建 | 第23-36页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 载体和菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第24页 |
| 2.2.2 B.suisS2的活化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 PCR扩增VceC基因上下游同源臂及庆大霉素 | 第25页 |
| 2.2.4 PCR扩增目的片段及胶回收 | 第25-26页 |
| 2.2.5 目的片段与pMD19T-Simple载体连接 | 第26页 |
| 2.2.6 连接产物的转化 | 第26页 |
| 2.2.7 重组质粒的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.8 重组载体的酶切鉴定及胶回收 | 第27-28页 |
| 2.2.9 同源重组载体PUC19G-VceC的构建 | 第28页 |
| 2.2.10 布鲁氏菌VceC缺失菌株的构建 | 第28-29页 |
| 2.3 结果 | 第29-34页 |
| 2.3.1 B.suisS2革兰染色鉴定结果 | 第29页 |
| 2.3.2 VceC同源臂及庆大霉素PCR扩增结果 | 第29-30页 |
| 2.3.3 重组载体pMD19T-Simple-VceC的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.4 重组载体pMD19T-Simple-G的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.5 同源重组载体PUC19G-VceC的鉴定 | 第32页 |
| 2.3.6 布鲁氏菌VceC缺失菌株的筛选 | 第32页 |
| 2.3.7 布鲁氏菌VceC缺失菌株的验证 | 第32-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 2.5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 布鲁氏菌VceC缺失菌株对GTC凋亡的影响 | 第36-45页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 菌株与细胞系 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第36-37页 |
| 3.2 方法 | 第37-40页 |
| 3.2.1 山羊滋养层细胞培养 | 第37页 |
| 3.2.2 细菌菌落总数(colonyformingunits,CFU)的测定 | 第37-38页 |
| 3.2.3 ΔVceC菌株在GTC胞内增殖的变化 | 第38页 |
| 3.2.4 ΔVceC菌株侵染GTC对其凋亡的影响 | 第38-40页 |
| 3.3 结果 | 第40-43页 |
| 3.3.1 ΔVceC菌株在GTC内增殖的变化 | 第40页 |
| 3.3.2 流式细胞术检测GTC凋亡变化 | 第40-42页 |
| 3.3.3 WesternBlot检测凋亡相关蛋白变化 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 布鲁氏菌VceC缺失菌株对GTC内质网应激的影响 | 第45-52页 |
| 4.1 材料 | 第45-46页 |
| 4.1.1 菌株与细胞系 | 第45页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第45-46页 |
| 4.2 方法 | 第46-47页 |
| 4.2.1 ΔVceC菌株侵染GTC对ERS的影响 | 第46页 |
| 4.2.2 ΔVceC菌株侵染GTC对UPR的激活 | 第46页 |
| 4.2.3 改变GTCERS对ΔVceC菌株胞内增殖的影响 | 第46页 |
| 4.2.4 免疫荧光检测ΔVceC菌株胞内增殖的变化 | 第46-47页 |
| 4.3 结果 | 第47-49页 |
| 4.3.1 ΔVceC菌株引起GTCERS标志蛋白表达量的变化 | 第47页 |
| 4.3.2 ΔVceC菌株侵染GTC对UPR的激活 | 第47-48页 |
| 4.3.3 改变GTCERS状态对ΔVceC菌株胞内增殖的影响 | 第48-49页 |
| 4.3.4 免疫荧光检测ΔVceC菌株在GTC胞内增殖的变化 | 第49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-51页 |
| 4.5 小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
| 缩略词 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
