摘要 | 第5-7页 |
abstract | 第7-8页 |
文献综述 | 第12-22页 |
第一章 猪流行性腹泻病毒研究现状 | 第12-22页 |
1.1 猪流行性腹泻病毒PEDV的世界流行状况 | 第12-13页 |
1.2 猪流行性腹泻病毒PEDV的基因组结构 | 第13-15页 |
1.3 临床症状及组织学病变 | 第15页 |
1.4 病毒传播 | 第15-16页 |
1.5 PEDV肠内复制动力学 | 第16页 |
1.6 PEDV感染的免疫应答 | 第16页 |
1.7 猪流行性腹泻病毒PEDV的细胞培养特性 | 第16-17页 |
1.8 PEDV的诊断方法概述 | 第17-19页 |
1.8.1 检测PEDV病毒抗原的病毒学试验 | 第17-18页 |
1.8.2 免疫荧光检测(IF) | 第18页 |
1.8.3 免疫组织化学(IHC) | 第18页 |
1.8.4 抗原ELISA | 第18-19页 |
1.8.5 基于聚合酶链反应(PCR)的PEDV核酸检测方法 | 第19页 |
1.8.6 胶体金检测技术(GICA) | 第19页 |
1.9 猪流行性腹泻病PED的疫苗研究现状 | 第19-20页 |
1.10 猪流行性腹泻病PED的防治 | 第20-21页 |
1.11 研究的目的及意义 | 第21-22页 |
第二章 猪流行性腹泻病毒陕西分离株的鉴定 | 第22-35页 |
2.1 材料与方法 | 第22-27页 |
2.1.1 病毒与细胞 | 第22页 |
2.1.2 载体与菌种 | 第22页 |
2.1.3 工具酶与主要试剂 | 第22页 |
2.1.4 主要仪器设备 | 第22页 |
2.1.5 病毒增殖 | 第22-23页 |
2.1.6 引物设计与合成 | 第23页 |
2.1.7 PEDV总RNA的提取 | 第23页 |
2.1.8 反转录 | 第23-24页 |
2.1.9 PCR扩增及检测 | 第24页 |
2.1.10 目的基因的克隆与鉴定 | 第24-25页 |
2.1.11 基因测序 | 第25页 |
2.1.12 S基因序列分析 | 第25-27页 |
2.2 结果及分析 | 第27-34页 |
2.2.1 病毒增殖的细胞病变镜检 | 第27页 |
2.2.2 PEDVS基因片段的RT-PCR扩增 | 第27-28页 |
2.2.3 鉴定阳性重组克隆 | 第28-29页 |
2.2.4 序列测定 | 第29页 |
2.2.5 S基因遗传进化树绘制与分析 | 第29-31页 |
2.2.6 S基因序列同源性分析 | 第31-33页 |
2.2.7 PEDV-SX株与CV777株S基因序列比对分析 | 第33-34页 |
2.3 讨论 | 第34页 |
2.4 小结 | 第34-35页 |
第三章 猪流行性腹泻病毒陕西分离株的全基因组序列测定及分析 | 第35-72页 |
3.1 材料与方法 | 第35-41页 |
3.1.1 病毒与细胞 | 第35页 |
3.1.2 载体与菌种 | 第35页 |
3.1.3 工具酶与主要试剂 | 第35页 |
3.1.4 仪器设备 | 第35页 |
3.1.5 引物设计 | 第35-37页 |
3.1.6 病毒总RNA的提取 | 第37页 |
3.1.7 反转录 | 第37页 |
3.1.8 目的片段的PCR扩增及检测 | 第37页 |
3.1.9 PCR扩增产物回收 | 第37页 |
3.1.10 PCR产物与载体连接 | 第37页 |
3.1.11 转化 | 第37-38页 |
3.1.12 质粒的提取与鉴定 | 第38页 |
3.1.13 序列比对与分析 | 第38-41页 |
3.2 结果及分析 | 第41-70页 |
3.2.1 全基因组RT-PCR电泳结果 | 第41页 |
3.2.2 阳性重组克隆PCR鉴定结果 | 第41-42页 |
3.2.3 PEDV全基因组分析 | 第42-45页 |
3.2.4 5’-UTR和3’-UTR序列分析 | 第45页 |
3.2.5 PEDVE、M、N、ORF3、ORF1基因遗传进化分析及同源性分析 | 第45-60页 |
3.2.6 生物信息学分析PEDV-SX株各结构蛋白 | 第60-70页 |
3.3 讨论 | 第70-71页 |
3.4 小结 | 第71-72页 |
全文总结 | 第72-73页 |
参考文献 | 第73-78页 |
致谢 | 第78-79页 |
作者简介 | 第79页 |