| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 縮略语/中英文对照 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 研究现状、成果 | 第13-14页 |
| 研究目的、方法 | 第14-16页 |
| 一、肝癌、癌前病变及慢乙肝患者FOXP3~+调节性T细胞的检测及意义 | 第16-46页 |
| 1.1 材料和方法 | 第16-26页 |
| 1.1.1 组织及外周血标本来源 | 第16-17页 |
| 1.1.2 临床病理资料 | 第17-19页 |
| 1.1.3 主要仪器耗材 | 第19-20页 |
| 1.1.4 主要实验试剂 | 第20页 |
| 1.1.5 主要试剂的配制 | 第20-22页 |
| 1.1.6 免疫组织化学染色 | 第22-23页 |
| 1.1.6.1 方法 | 第22-23页 |
| 1.1.6.2 免疫组化结果判疋 | 第23页 |
| 1.1.7 RT-PCR检测冷冻肝癌及癌旁组织FOXP3 mRNA | 第23-25页 |
| 1.1.8 流式细胞仪检测患者外周血CD4~+CD25~+FOXP3~+Treg | 第25-26页 |
| 1.1.9 统计学方法 | 第26页 |
| 1.2 结果 | 第26-43页 |
| 1.2.1 肝组织穿刺患者的组织和外周血结果 | 第26-36页 |
| 1.2.2 肝癌切除标本癌及癌旁的FOXP3~+Treg/CD8~+T细胞的表达情况 | 第36-43页 |
| 1.3 讨论 | 第43-45页 |
| 1.4 小结 | 第45-46页 |
| 二、FOXP3~+调节性T细胞与肝癌患者HBV感染背景相关 | 第46-55页 |
| 2.1 材料和方法 | 第46-49页 |
| 2.1.1 组织标本来源 | 第46页 |
| 2.1.2 临床病理资料 | 第46-47页 |
| 2.1.3 主要仪器耗材 | 第47页 |
| 2.1.4 主要实验试剂 | 第47-48页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第48页 |
| 2.1.6 免疫组织化学染色 | 第48-49页 |
| 2.1.7 实验结果判定 | 第49页 |
| 2.1.8 统计学方法 | 第49页 |
| 2.2 结果 | 第49-52页 |
| 2.2.1 FOXP3、CD34以及HBcAg在肝炎、癌前病变及肝癌中的表达 | 第49页 |
| 2.2.2 FOXP3+ Treg与肝癌组织CD34的相关性 | 第49-51页 |
| 2.2.3 肝癌患者肿瘤浸润FOXP3+Tregs与自身慢性乙型肝炎背景的关系 | 第51-52页 |
| 2.2.4 肝癌患者的复发与自身感染HBV背景的关系 | 第52页 |
| 2.3 讨论 | 第52-54页 |
| 2.4 小结 | 第54-55页 |
| 三、体外FOXP3~+Treg免疫抑制及水飞蓟宾抑制肝癌的实验 | 第55-77页 |
| 3.1 材料与方法 | 第55-64页 |
| 3.1.1 细胞来源 | 第55页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第55-56页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第56页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第56-57页 |
| 3.1.5 HepG 2以及HepG 2.2.1.5的培养及冻融抗原制备 | 第57-58页 |
| 3.1.6 外周血单个核细胞分离 | 第58页 |
| 3.1.7 外周血单个核细胞表面标记物CD3、CD4、CD25染色 | 第58-59页 |
| 3.1.8 PBMC胞内标记物FOXP3染色 | 第59页 |
| 3.1.9 磁珠分选CD8~+T细胞 | 第59-60页 |
| 3.1.10 磁珠分选CD4~+ CD25~+调节性T细胞 | 第60-61页 |
| 3.1.11 CD4~+CD25~+T细胞/CD8~+T细胞培养 | 第61页 |
| 3.1.12 肝癌特异的细胞毒T细胞(CTL)制备 | 第61页 |
| 3.1.13 ELISpot实验检测分泌FIN-γ的CTL频率 | 第61-62页 |
| 3.1.14 MTT法检测肝癌细胞抑制率 | 第62-63页 |
| 3.1.15 Annexin V试剂盒流式细胞仪检测凋亡 | 第63页 |
| 3.1.16 荧光显微镜观察肝癌细胞凋亡 | 第63页 |
| 3.1.17 CTL对肝癌细胞系HepG2、HepG2.2.1.5的杀伤实验 | 第63-64页 |
| 3.1.18 Treg对CTL杀伤活性的抑制 | 第64页 |
| 3.1.19 水飞蓟宾对CTL杀伤活性的影响 | 第64页 |
| 3.1.20 水飞蓟宾对Treg抑制CTL杀伤活性的影响 | 第64页 |
| 3.1.21 飞蓟宾对肝癌细胞系的凋亡诱导作用 | 第64页 |
| 3.1.22 统计学处理 | 第64页 |
| 3.2 结果 | 第64-74页 |
| 3.2.1 流式细胞仪测定磁珠分选CD4~+D25~+Treg及CD8+T细胞纯率 | 第64-65页 |
| 3.2.2 CTL杀伤活性测定 | 第65-66页 |
| 3.2.3 Treg对CTL杀伤活性的影响 | 第66-68页 |
| 3.2.4 水飞蓟宾对CTL杀伤活性的影响 | 第68-70页 |
| 3.2.5 水飞蓟宾通过诱导凋亡杀伤肝癌细胞 | 第70-72页 |
| 3.2.6 水飞蓟宾对Treg、CTL及肝癌细胞系共培养体系的影响 | 第72-74页 |
| 3.3 讨论 | 第74-76页 |
| 3.4 小结 | 第76-77页 |
| 全文结论 | 第77-78页 |
| 论文创新点 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第85-87页 |
| 综述1 | 第87-109页 |
| CD4~+CD25~+FOXP3~+调节性T细胞在肝病中的研究进展 | 第87-109页 |
| 综述1参考文献 | 第100-109页 |
| 综述2 | 第109-115页 |
| 水飞蓟宾在肝病治疗中的作用及研究进展 | 第109-115页 |
| 综述2参考文献 | 第111-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
