| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 多粘菌素的结构 | 第12-13页 |
| 1.2 多粘菌素合成相关基因 | 第13-16页 |
| 1.2.1 多粘菌素合成酶基因簇 | 第13-15页 |
| 1.2.2 多粘菌素合成酶激活基因sfp | 第15页 |
| 1.2.3 多粘菌素前体合成基因 | 第15-16页 |
| 1.2.4 多粘菌素合成调控基因spo0A、abrB | 第16页 |
| 1.3 多粘菌素合成途径 | 第16-18页 |
| 1.4 多粘菌素的应用 | 第18页 |
| 1.4.1 抗菌作用 | 第18页 |
| 1.4.2 抗内毒素作用 | 第18页 |
| 1.5 多粘菌素的毒性 | 第18-19页 |
| 1.6 展望 | 第19页 |
| 1.7 选题意义、技术路线、研究内容 | 第19-20页 |
| 1.7.1 选题意义 | 第19-20页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第20页 |
| 1.7.3 研究内容 | 第20页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 第二章 发酵过程中多粘菌素合成相关基因转录水平与多粘菌素产量相关性研究 | 第23-39页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 材料与方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 菌种 | 第23-24页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第24页 |
| 2.2.3 主要药品与试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.4 培养基 | 第25页 |
| 2.2.5 菌种培养方法 | 第25-26页 |
| 2.2.6 相关基因的扩增 | 第26-28页 |
| 2.2.7 基因转录水平分析 | 第28-30页 |
| 2.2.8 多粘菌素E效价的测定 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-37页 |
| 2.3.1 目的基因序列的获得 | 第31-32页 |
| 2.3.2 发酵过程中多粘菌素合成相关基因的转录水平检测 | 第32-35页 |
| 2.3.3 发酵过程中多粘菌素合成相关基因的转录与多粘菌素产量的关系 | 第35-36页 |
| 2.3.4 高产零产菌株中多粘菌素合成相关基因的转录差异 | 第36-37页 |
| 2.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-39页 |
| 第三章 前体物质添加对多粘菌素E合成相关基因转录水平及产量的影响 | 第39-53页 |
| 3.1 前言 | 第39页 |
| 3.2 材料与方法 | 第39-44页 |
| 3.2.1 菌种 | 第39页 |
| 3.2.2 主要仪器设备 | 第39-40页 |
| 3.2.3 主要药品与试剂 | 第40-41页 |
| 3.2.4 培养基 | 第41页 |
| 3.2.5 菌种培养方法 | 第41页 |
| 3.2.6 氨基酸添加处理 | 第41页 |
| 3.2.7 多粘菌素E效价的测定 | 第41页 |
| 3.2.8 基因转录水平分析 | 第41-44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-51页 |
| 3.3.1 添加前体氨基酸对多粘菌素E产量与合成相关基因转录的影响 | 第44-48页 |
| 3.3.2 添加间接前体氨基酸对多粘菌素E产量与合成相关基因转录的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.3 添加非前体氨基酸对多粘菌素E产量与合成相关基因转录的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.4 不同浓度豆油对多粘菌素E产量与合成相关基因转录的影响 | 第50-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-53页 |
| 第四章 构建多粘菌素合成负调控基因abrB基因突变株 | 第53-74页 |
| 4.1 前言 | 第53页 |
| 4.2 材料与方法 | 第53-62页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第53页 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 | 第53-54页 |
| 4.2.3 主要药品与试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.4 培养基与缓冲液 | 第55页 |
| 4.2.5 引物 | 第55-56页 |
| 4.2.6 多粘类芽孢杆菌电转化条件优化 | 第56-58页 |
| 4.2.7 pMD19-H1KmH2质粒构建及突变株株构建实验流程 | 第58页 |
| 4.2.8 PCR技术扩增abrB上下游同源臂H1、H2、卡那抗性基因Km | 第58-60页 |
| 4.2.9 基因片段和质粒载体的双酶切 | 第60页 |
| 4.2.10 连接与转化 | 第60-61页 |
| 4.2.11 P.polymyxa C12感受态细胞的制备及电转化 | 第61-62页 |
| 4.3 结果与分析 | 第62-72页 |
| 4.3.1 P. polymyxa C12可用的质粒及抗性基因的选择 | 第62页 |
| 4.3.2 P. polymyxa C12电转化条件优化 | 第62-65页 |
| 4.3.3 卡那抗性基因Km克隆 | 第65-66页 |
| 4.3.4 abrB上下游同源臂基因片段的获得 | 第66-67页 |
| 4.3.5 重组质粒pMD19-H1KmH2的构建 | 第67-68页 |
| 4.3.6 重组质粒pMD19-H1KmH2鉴定 | 第68-69页 |
| 4.3.7 质粒pMD19-H1KmH2转化P. polymyxa C12 | 第69-71页 |
| 4.3.8 长片段H1KmH2转化P. polymyxa C12 | 第71页 |
| 4.3.9 转化子中卡那抗性基因Km转录水平检测 | 第71-72页 |
| 4.4 本章小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-74页 |
| 第五章 总结与展望 | 第74-76页 |
| 5.1 总结 | 第74-75页 |
| 5.2 展望 | 第75-76页 |
| 附录 | 第76-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第81页 |
