| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 综述 | 第10-33页 |
| 1.1 无缝克隆与基因融合技术研究进展 | 第10-18页 |
| 1.1.1 无缝克隆与基因融合技术 | 第10-16页 |
| 1.1.2 无缝克隆与基因融合的应用 | 第16-18页 |
| 1.2 异源蛋白和多肽在大肠杆菌中表达的研究进展 | 第18-27页 |
| 1.2.1 大肠杆菌表达系统的研究现状和存在问题 | 第18-22页 |
| 1.2.2 富含二硫键的蛋白质及多肽在大肠杆菌中的表达 | 第22-25页 |
| 1.2.3 利用大肠杆菌表达毒素多肽的意义和进展 | 第25-27页 |
| 1.3 全基因合成技术研究进展 | 第27-33页 |
| 1.3.1 寡核苷酸的化学合成研究进展 | 第27-28页 |
| 1.3.2 基因拼接技术研究进展 | 第28-31页 |
| 1.3.3 全基因合成的应用前景 | 第31-33页 |
| 第二章 长引物和PCR介导的分子克隆方法的建立 | 第33-48页 |
| 2.1 前言 | 第33-34页 |
| 2.2 材料和方法 | 第34-42页 |
| 2.2.1 材料 | 第34-35页 |
| 2.2.2 嵌合体的构建 | 第35-40页 |
| 2.2.3 DNA片段插入载体 | 第40页 |
| 2.2.4 多个片段的拼接 | 第40-42页 |
| 2.3 结果 | 第42-46页 |
| 2.3.1 pGADT7-2000 嵌合体的构建 | 第42-44页 |
| 2.3.2 MP克隆和RF克隆比较 | 第44-45页 |
| 2.3.3 MP克隆应用于多个片段的拼接 | 第45-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 在大肠杆菌中表达蜘蛛毒素多肽的策略 | 第48-72页 |
| 3.1 前言 | 第48-49页 |
| 3.2 材料和方法 | 第49-57页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 3.2.2 表达载体构建 | 第50-53页 |
| 3.2.3 rHHTX-IV的表达、纯化与鉴定 | 第53-56页 |
| 3.2.4 rTX6868等毒素的表达与纯化 | 第56-57页 |
| 3.3 结果 | 第57-70页 |
| 3.3.1 载体构建 | 第57-58页 |
| 3.3.2 rHNTX-IV的表达、纯化与鉴定 | 第58-67页 |
| 3.3.3 r TX-6868 等毒素多肽的表达纯化 | 第67-70页 |
| 3.4 讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 单管反向PCR介导的全基因合成方法 | 第72-85页 |
| 4.1 前言 | 第72页 |
| 4.2 材料与方法 | 第72-80页 |
| 4.2.1 材料 | 第72页 |
| 4.2.2 引物设计 | 第72-75页 |
| 4.2.3 STRP法基因合成 | 第75-77页 |
| 4.2.4 错误修正 | 第77-78页 |
| 4.2.5 原核表达 | 第78页 |
| 4.2.6 带有his标签蛋白的镍柱纯化 | 第78-80页 |
| 4.3 结果 | 第80-84页 |
| 4.3.1 eGFP、RFP和TEV蛋白酶基因合成 | 第80-82页 |
| 4.3.2 1473 bp的基因合成 | 第82-83页 |
| 4.3.3 eGFP、RFP和TEV蛋白酶的原核表达 | 第83-84页 |
| 4.4 讨论 | 第84-85页 |
| 主要研究结论与进一步研究设想 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 缩写表 | 第96-98页 |
| 论文发表情况 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
