| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 氨基葡萄糖 | 第10-11页 |
| 1.2 glmS核酶核糖开关 | 第11-13页 |
| 1.2.1 核糖开关的结构特点 | 第11-12页 |
| 1.2.2 核糖开关的作用机理 | 第12页 |
| 1.2.3 核糖开关的应用 | 第12-13页 |
| 1.3 氨基葡萄糖合成机理 | 第13-14页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌表达体系 | 第14-16页 |
| 1.4.1 枯草芽孢杆菌表达系统的简介 | 第14-15页 |
| 1.4.2 枯草芽孢杆菌表达系统表达载体 | 第15页 |
| 1.4.3 枯草芽孢杆菌常用转化方法 | 第15-16页 |
| 1.5 论文研究的内容及意义 | 第16-18页 |
| 1.5.1 内容 | 第16页 |
| 1.5.2 意义 | 第16-18页 |
| 第2章 glmS核酶生物传感器的构建及验证 | 第18-40页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.2.1 菌种与载体 | 第18-19页 |
| 2.2.2 引物 | 第19页 |
| 2.2.3 培养基与试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.2.4 分子试剂盒与分子试剂 | 第20页 |
| 2.2.5 仪器 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-31页 |
| 2.3.1 实验流程 | 第21-22页 |
| 2.3.2 枯草芽孢杆菌168基因组和egfp质粒的提取 | 第22-23页 |
| 2.3.3 glmS核酶目的片段的克隆 | 第23-24页 |
| 2.3.4 egfp基因的克隆 | 第24-25页 |
| 2.3.5 生物传感器的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.6 克隆载体的构建与转化 | 第26-27页 |
| 2.3.7 阳性重组子的筛选与测序 | 第27-28页 |
| 2.3.8 表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.3.9 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第29-30页 |
| 2.3.10 阳性重组子的筛选 | 第30页 |
| 2.3.11 生物传感器的功能测试 | 第30-31页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第31-38页 |
| 2.4.1 枯草芽孢杆菌168基因组和egfp质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.4.2 glmS核酶片段与egfp基因的扩增 | 第32-34页 |
| 2.4.3 大肠杆菌阳性重组子的筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4.4 表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.4.5 枯草芽孢杆菌阳性重组子的筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| 2.4.6 生物传感器的功能检测 | 第37-38页 |
| 2.5 总结 | 第38-40页 |
| 第3章 酿酒酵母氨基葡萄糖合酶和乙酰化酶基因在枯草芽孢杆菌中的异源表达 | 第40-62页 |
| 3.1 引言 | 第40-41页 |
| 3.2 实验材料 | 第41-44页 |
| 3.2.1 菌种与载体 | 第41页 |
| 3.2.2 引物 | 第41-42页 |
| 3.2.3 培养基 | 第42-43页 |
| 3.2.4 分子试剂盒及分子试剂 | 第43页 |
| 3.2.5 仪器 | 第43-44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-53页 |
| 3.3.1 实验流程 | 第44-45页 |
| 3.3.2 S288C基因组和重组质粒的提取 | 第45页 |
| 3.3.3 目的基因的扩增 | 第45-47页 |
| 3.3.4 目的基因的拼接 | 第47-48页 |
| 3.3.5 克隆载体的构建与转化 | 第48-49页 |
| 3.3.6 阳性重组子的筛选与测序 | 第49-50页 |
| 3.3.7 表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.3.8 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第51页 |
| 3.3.9 重组子的筛选与鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.10 枯草芽孢杆菌工程菌诱导表达 | 第52页 |
| 3.3.11 枯草芽孢杆菌工程菌诱导表达条件优化 | 第52-53页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第53-61页 |
| 3.4.1 酿酒酵母S288C基因组和重组质粒的提取 | 第53-55页 |
| 3.4.2 gfa1与gna1基因的扩增 | 第55-57页 |
| 3.4.3 大肠杆菌阳性重组子的筛选 | 第57页 |
| 3.4.4 表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 3.4.5 阳性重组子的鉴定 | 第58-59页 |
| 3.4.6 诱导表达结果 | 第59-60页 |
| 3.4.7 诱导条件优化结果 | 第60-61页 |
| 3.5 总结 | 第61-62页 |
| 第4章 枯草芽孢杆菌氨基葡萄糖合酶和酿酒酵母乙酰化酶在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第62-86页 |
| 4.1 引言 | 第62-63页 |
| 4.2 实验材料 | 第63-66页 |
| 4.2.1 菌种与载体 | 第63页 |
| 4.2.2 引物 | 第63页 |
| 4.2.3 培养基 | 第63-64页 |
| 4.2.4 分子试剂盒及分子试剂 | 第64-65页 |
| 4.2.5 仪器 | 第65-66页 |
| 4.3 实验方法 | 第66-74页 |
| 4.3.1 实验流程 | 第66-67页 |
| 4.3.2 枯草芽孢杆菌168基因组的提取 | 第67页 |
| 4.3.3 目的基因的扩增 | 第67页 |
| 4.3.4 克隆载体的构建与转化 | 第67-68页 |
| 4.3.5 阳性重组子的筛选与测序 | 第68-69页 |
| 4.3.6 表达载体的构建 | 第69-70页 |
| 4.3.7 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第70-71页 |
| 4.3.8 重组表达载体阳性重组子的筛选与鉴定 | 第71页 |
| 4.3.9 整合片段的获取 | 第71-72页 |
| 4.3.10 整合型工程菌的构建 | 第72页 |
| 4.3.11 整合型阳性重组子的筛选与鉴定 | 第72-73页 |
| 4.3.12 工程菌诱导表达及荧光检测 | 第73页 |
| 4.3.13 工程菌发酵条件优化 | 第73-74页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第74-84页 |
| 4.4.1 枯草芽孢杆菌168基因组的提取 | 第74页 |
| 4.4.2 glms基因的扩增 | 第74-75页 |
| 4.4.3 大肠杆菌重组子的筛选 | 第75-76页 |
| 4.4.4 表达载体的构建 | 第76-77页 |
| 4.4.5 阳性重组子的鉴定 | 第77-78页 |
| 4.4.6 整合片段的获取 | 第78页 |
| 4.4.7 整合工程菌阳性重组子的鉴定 | 第78-79页 |
| 4.4.8 诱导表达结果 | 第79-80页 |
| 4.4.9 发酵优化结果 | 第80-84页 |
| 4.5 总结 | 第84-86页 |
| 第5章 结论与展望 | 第86-88页 |
| 5.1 结论 | 第86-87页 |
| 5.2 展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第96页 |
