| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 第一章 合成生物学与Riboswitch 相关研究 | 第13-24页 |
| 1 合成生物学 | 第13-15页 |
| ·合成生物学概念 | 第13页 |
| ·合成生物学的研究进展 | 第13-14页 |
| ·合成生物学的研究意义 | 第14页 |
| ·合成生物学面临的发展机遇与现实困难 | 第14-15页 |
| ·合成生物学在基因合成方面的优势 | 第14-15页 |
| ·合成生物学发展中的现实困难 | 第15页 |
| 2 核糖开关 | 第15-23页 |
| ·核糖开关的研究历史 | 第15-16页 |
| ·核糖开关结构特点 | 第16-19页 |
| ·核糖开关结构 | 第16-17页 |
| ·核糖开关与配体的结合特点 | 第17-19页 |
| ·核糖开关的适体与配体 | 第19页 |
| ·核糖开关基因调控 | 第19-21页 |
| ·转录阶段表达调控机制 | 第20-21页 |
| ·翻译阶段表达调控机制 | 第21页 |
| ·核糖开关分类 | 第21-23页 |
| ·核苷酸类核糖开关 | 第21-22页 |
| ·Purine-Riboswitch | 第21页 |
| ·Adenine-Riboswitch | 第21-22页 |
| ·氨基酸类核糖开关 | 第22页 |
| ·SAM-Riboswitch | 第22页 |
| ·Lysine-Riboswitch | 第22页 |
| ·维生素类核糖开关 | 第22-23页 |
| ·TPP-Riboswitch | 第22页 |
| ·FMN-Riboswitch | 第22页 |
| ·Ado-Cbl-Riboswitch | 第22-23页 |
| 3 前景 | 第23-24页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第24-26页 |
| 1 实验目的和意义 | 第24页 |
| 2 研究内容 | 第24-25页 |
| 3 实验流程图 | 第25-26页 |
| 第三章 由寡核苷酸到全长Riboswitch 序列的合成 | 第26-39页 |
| 1 材料与试剂 | 第27-28页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·Amp Stock（100 mg/ml） | 第27页 |
| ·IPTG Stock（24 mg/ml） | 第27页 |
| ·X-Gal（20 mg/ml） | 第27页 |
| ·LB/Amp 液体培养基（500 ml） | 第27-28页 |
| ·质粒提取试剂 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-33页 |
| ·Riboswitch OligoMix PCR | 第28-29页 |
| ·Riboswitch OligoMix 扩增条件的优化 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第29页 |
| ·OligoMix 酶切 | 第29-30页 |
| ·MlyⅠ酶切后OligoMix 组装 | 第30页 |
| ·MlyⅠ酶切后OligoMix 纯化 | 第30页 |
| ·OligoMix 同源杂合退火 | 第30页 |
| ·同源杂合片段连接 | 第30页 |
| ·组装后片段PCR 扩增 | 第30-31页 |
| ·连接与转化 | 第31-33页 |
| ·连接反应 | 第31-32页 |
| ·连接产物转化步骤 | 第32页 |
| ·质粒提取 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-37页 |
| ·OligoMix 丰度富集及纯化 | 第33-34页 |
| ·纯化产物Mly I 限制性酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·MlyⅠ酶切后OligoMix 组装 | 第35页 |
| ·组装后片段PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·质粒提取检测 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 Riboswitch 相关文库构建 | 第39-53页 |
| 1 材料与试剂 | 第39-40页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·试剂的配制 | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-45页 |
| ·质粒稀释，PCR | 第40-41页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第41-42页 |
| ·纯化产物PCR 扩增，电泳检测 | 第42-44页 |
| ·DNA 模板体外转录Riboswitch | 第44-45页 |
| ·BbsⅠ限制性酶切3’末端引物序列 | 第44-45页 |
| ·体外转录 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-51页 |
| ·质粒PCR | 第45-46页 |
| ·目的片段回收 | 第46-47页 |
| ·目的片段回收后PCR，纯化，含量检测及测定 | 第47-49页 |
| ·Bbs I 限制性酶切3’末端侧翼引物，纯化产物 | 第49页 |
| ·体外转录Riboswitch 及浓度测定 | 第49页 |
| ·二级结构折叠预测与适体保守性分析 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
