| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 虾夷扇贝概况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 虾夷扇贝分类学地位和形态学特征 | 第11页 |
| 1.1.2 我国虾夷扇贝养殖现状和面临的问题 | 第11-12页 |
| 1.1.3 虾夷扇贝的病害防治 | 第12页 |
| 1.1.4 虾夷扇贝的分子生物学研究 | 第12-13页 |
| 1.2 无脊椎动物先天性免疫 | 第13-14页 |
| 1.3 虾夷扇贝酚氧化酶基因的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.4 虾夷扇贝热休克蛋白60基因的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 1.5.1 本研究的目的 | 第16页 |
| 1.5.2 本研究的意义 | 第16-17页 |
| 第二章 TYR基因克隆、序列分析、表达特性研究 | 第17-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 实验样品 | 第17页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-26页 |
| 2.2.1 RNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 RNA反转录 | 第19-20页 |
| 2.2.3 TYR基因全序列的获得 | 第20-24页 |
| 2.2.3.1 3’FULLRACE | 第21-22页 |
| 2.2.3.2 5’FULLRACE | 第22-24页 |
| 2.2.4 序列分析和系统发育树构建 | 第24页 |
| 2.2.5 TYR基因相对转录量的测定 | 第24-26页 |
| 2.2.5.1 定量引物设计以及相关性验证 | 第24-25页 |
| 2.2.5.2 TYR基因在不用组织中的相对转录量 | 第25页 |
| 2.2.5.3 鳗弧菌对虾夷扇贝鳃中TYR基因转录水平影响的测定 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-33页 |
| 2.3.1 RNA的提取 | 第26页 |
| 2.3.2 TYR全序列的获得及序列分析 | 第26-28页 |
| 2.3.3 虾夷扇贝TYR氨基酸序列同源分析 | 第28-30页 |
| 2.3.4 TYR序列同源性分析见图 4，参与比对的物种如下: | 第30页 |
| 2.3.5 TYR相对转录量的测定 | 第30-33页 |
| 2.3.5.1 标准曲线相关性和产物单一性检验 | 第30-32页 |
| 2.3.5.2 TYR基因在不同组织中的相对转录量 | 第32页 |
| 2.3.5.3 鳗弧菌注射后鳃中TYR基因转录水平的影响 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 HSP60基因克隆、序列分析、表达及甲基化状态研究 | 第35-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 实验样品 | 第35页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第35页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-44页 |
| 3.2.1 总RNA提取及反转录 | 第36页 |
| 3.2.2 HSP60基因全序列的获得 | 第36页 |
| 3.2.3 HSP60基因启动子区域序列的获得 | 第36-40页 |
| 3.2.3.1 DNA的提取 | 第37页 |
| 3.2.3.2 第一个内含子边界的确定 | 第37-38页 |
| 3.2.3.3 基因步移特异性引物设计的原则 | 第38页 |
| 3.2.3.4 基因步移 | 第38-40页 |
| 3.2.3.5 查找HSP60启动子当中假定SNP位点 | 第40页 |
| 3.2.4 序列分析和系统发育树构建 | 第40-41页 |
| 3.2.5 HSP60基因相对转录量的测定 | 第41-42页 |
| 3.2.5.1 定量引物设计以及相关性验证 | 第41页 |
| 3.2.5.2 HSP60基因在不同组织中的相对转录量 | 第41页 |
| 3.2.5.3 温度对虾夷扇贝鳃中HSP60基因转录水平影响的测定 | 第41-42页 |
| 3.2.6 HSP60甲基化状态研究 | 第42-44页 |
| 3.2.6.1 DNA亚硫酸氢钠修饰 | 第42页 |
| 3.2.6.2 PCR扩增 | 第42-44页 |
| 3.2.6.3 查找HSP60甲基化位点 | 第44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-53页 |
| 3.3.1 总RNA的提取 | 第44-45页 |
| 3.3.2 HSP60全序列的获得及序列分析 | 第45-47页 |
| 3.3.3 HSP60启动子序列的获得 | 第47-49页 |
| 3.3.4 HSP60基因启动子多样性分析 | 第49页 |
| 3.3.5 HSP60氨基酸序列同源分析 | 第49-50页 |
| 3.3.6 HSP60相对转录量的测定 | 第50-53页 |
| 3.3.6.1 标准曲线相关性和产物单一性检验 | 第50-52页 |
| 3.3.6.2 HSP60基因升温前后不同组织中的相对转录量 | 第52-53页 |
| 3.3.7 HSP60甲基化状态分析 | 第53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
