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植物MAPK级联途径基因家族的进化分析及番茄SlMPK13的功能鉴定

致谢第8-13页
缩略词第13-15页
摘要第15-17页
Abstract第17-19页
前言第20-23页
1 文献综述第23-36页
    1.1 MAPK级联途径第23-26页
        1.1.1 基本组成第23页
        1.1.2 植物MAPKKK第23-24页
        1.1.3 植物MAPKK第24-25页
        1.1.4 植物MAPK第25-26页
    1.2 植物MAPK级联途径的生物学功能第26-33页
        1.2.1 在植物生长发育中的作用第26-29页
            1.2.1.1 在细胞分裂中的作用第27-28页
            1.2.1.2 在细胞分化及发育中的作用第28页
            1.2.1.3 在植物生殖发育中的作用第28-29页
            1.2.1.4 在植物衰老和器官脱落中的作用第29页
        1.2.2 在植物响应生物胁迫中的作用第29-31页
        1.2.3 在植物响应非生物胁迫中的作用第31-33页
    1.3 植物MAPK的下游作用因子第33-35页
    1.4 番茄MAPK级联途径的研究进展第35-36页
2 植物MAPK级联途径基因家族的进化及相关基因的表达分析第36-83页
    2.1 材料与方法第37-40页
        2.1.1 试验材料第37页
        2.1.2 试验试剂第37页
        2.1.3 植物MAPK、MAPKK、MAPKKK家族成员鉴定第37-38页
        2.1.4 植物MAPK级联途径家族基因序列特征分析第38页
        2.1.5 苗期逆境胁迫处理第38-39页
        2.1.6 植物MAPK级联途径家族基因的表达分析第39-40页
            2.1.6.1 植物总RNA的提取反转录合成cDNA第39页
            2.1.6.2 荧光实时定量PCR第39-40页
    2.2 结果与分析第40-81页
        2.2.1 植物MAPKKK基因家族成员的鉴定及进化分析第40-62页
            2.2.1.1 番茄MAPKKK基因的鉴定及表达特征分析第40-49页
            2.2.1.2 黄瓜MAPKKK基因家族成员的鉴定及表达分析第49-56页
            2.2.1.3 植物MAPKKK基因家族的进化分析第56-62页
        2.2.2 植物MAPKK基因家族成员的鉴定及进化分析第62-72页
            2.2.2.1 番茄MAPKK基因家族成员的鉴定及表达分析第62-66页
            2.2.2.2 黄瓜MAPKK基因家族成员的鉴定及表达分析第66-69页
            2.2.2.3 植物MAPKK基因家族的进化分析第69-72页
        2.2.3 植物MAPK基因家族成员的鉴定及进化分析第72-81页
            2.2.3.1 番茄MAPK基因家族成员的鉴定及表达分析第72-74页
            2.2.3.2 黄瓜MAPK基因家族成员的鉴定及表达分析第74-78页
            2.2.3.3 植物MAPK基因家族的进化分析第78-81页
    2.3 讨论第81-83页
        2.3.1 植物MAPKKK基因家族的进化第81页
        2.3.2 植物MAPKK基因家族的进化第81-82页
        2.3.3 植物MAPK基因家族的进化第82-83页
3 番茄SlMPK13的表达特征及所编码蛋白质的基本特性分析第83-99页
    3.1 材料与方法第84-91页
        3.1.1 试验材料第84页
        3.1.2 试验试剂第84页
        3.1.3 SlMPK13的时空表达特性分析第84-88页
            3.1.3.1 QRT-PCR分析第84-85页
            3.1.3.2 植物组织原位杂交分析第85-88页
        3.1.4 SlMPK13的基本特性分析第88-91页
            3.1.4.1 原核表达分析第88-90页
            3.1.4.2 蛋白SDS-PAGE电泳及Western Blot印迹第90页
            3.1.4.3 SlMPK13的亚细胞定位第90-91页
    3.2 结果与分析第91-97页
        3.2.1 SlMPK13在番茄开放花的雄蕊中优势表达第91-94页
        3.2.2 SlMPK13的磷酸化性质分析第94-95页
        3.2.3 SlMPK13的亚细胞定位第95-97页
    3.3 讨论第97-99页
        3.3.1 SlMPK13是一个在成熟花药中优势表达的重要基因第97页
        3.3.2 SlMPK13定位于细胞各部位并具有MPK激酶活性第97-99页
4 番茄SlMPK13在花粉发育中的功能鉴定第99-127页
    4.1 材料方法第100-107页
        4.1.1 试验材料与试验试剂第100页
        4.1.2 RNAi载体的构建第100-101页
            4.1.2.1 正义片段和反义片段序列扩增第100页
            4.1.2.2 CaMV35S组成型启动子的RNAi载体构建第100-101页
            4.1.2.3 番茄花粉特异启动子LAT52的RNAi载体构建第101页
        4.1.3 RNAi载体对番茄植株的遗传转化第101-103页
            4.1.3.1 农杆菌菌株的获得与侵染菌液制备第101-102页
            4.1.3.2 番茄无菌苗的培养第102页
            4.1.3.3 番茄植株的遗传转化第102-103页
        4.1.4 转基因植株的分子检测第103-104页
            4.1.4.1 PCR检测第103-104页
            4.1.4.2 GUS组织化学染色第104页
            4.1.4.3 QRT-PCR检测第104页
        4.1.5 转基因番茄植株的表型观察第104-107页
            4.1.5.1 转基因番茄植株的形态观察第104-105页
            4.1.5.2 花粉生活力观察第105-106页
            4.1.5.3 花粉形态扫描电镜观察第106页
            4.1.5.4 花粉半薄切片观察第106页
            4.1.5.5 花粉形态超薄透射电镜观察第106-107页
    4.2 结果与分析第107-124页
        4.2.1 抑制SlMPK13表达对番茄营养生长的影响第107-111页
        4.2.2 抑制SlMPK13表达对番茄花器官的影响第111-113页
        4.2.3 SlMPK13组织特异性抑制表达对番茄花粉发育及坐果的影响第113-119页
        4.2.4 抑制SlMPK13表达对花粉超微结构的影响第119-124页
    4.3 讨论第124-127页
        4.3.1 SlMPK13在番茄生长发育过程中的作用存在多效型第124-125页
        4.3.2 SlMPK13在番茄花粉发育过程中起重要作用第125-126页
        4.3.3 SlMPK13通过影响细胞膜和液泡的变化而影响番茄花粉发育第126-127页
5 抑制SlMPK13的表达对番茄转录组水平的影响第127-139页
    5.1 材料与方法第128-130页
        5.1.1 试验材料与试验试剂第128页
        5.1.2 植物总RNA提取及质量检测第128页
        5.1.3 转录组文库的构建及测序第128-129页
        5.1.4 测序数据处理第129-130页
    5.2 结果与分析第130-137页
        5.2.1 差异基因的鉴定第130-132页
        5.2.2 差异表达基因的基因本体论分析第132-134页
        5.2.3 差异表达基因的生物学代谢途径分析第134-137页
    5.3 讨论第137-139页
        5.3.1 转录组测序研究MAPK下游作用因子的可行性第137页
        5.3.2 SlMPK13在番茄花粉成熟过程中的调控机制推测第137-139页
结论第139-141页
参考文献第141-157页
附表第157-186页
博士在读期间发表的论文第186页

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