| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 NF-κB信号通路概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 NF-κB成员组成及结构特点 | 第12页 |
| 1.1.2 NF-κB抑制蛋白 | 第12-13页 |
| 1.1.3 IκB激酶复合物 | 第13页 |
| 1.2 NF-κB的激活 | 第13-15页 |
| 1.2.1 NF-κB经典途径 | 第13-14页 |
| 1.2.2 NF-κB非经典途径 | 第14页 |
| 1.2.3 NF-κB活化的其他途径 | 第14-15页 |
| 1.3 NF-κB信号通路的调节 | 第15页 |
| 1.3.1 正反馈调节 | 第15页 |
| 1.3.2 负反馈调节 | 第15页 |
| 1.4 NF-κB的生物学作用 | 第15-18页 |
| 1.4.1 抗细胞凋亡 | 第15-16页 |
| 1.4.2 促细胞凋亡 | 第16页 |
| 1.4.3 调控细胞周期 | 第16-17页 |
| 1.4.4 参与免疫反应 | 第17-18页 |
| 1.4.5 促进肿瘤发生 | 第18页 |
| 1.5 PKR介导NF-κB的激活 | 第18页 |
| 1.6 鱼类NF-κB的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第21-23页 |
| 1.7.1 本研究目的 | 第21-22页 |
| 1.7.2 本研究意义 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-53页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第23-28页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要试剂盒 | 第25页 |
| 2.1.4 细胞实验主要试剂及耗材 | 第25页 |
| 2.1.5 质粒载体、菌种与细胞 | 第25-26页 |
| 2.1.6 引物表 | 第26-28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28页 |
| 2.3 相关软件 | 第28-29页 |
| 2.4 Ci IKKβ 的克隆 | 第29-32页 |
| 2.4.1 Ci IKKβ 的同源克隆 | 第29-30页 |
| 2.4.2 Ci IKKβ 的 3′-RACE | 第30页 |
| 2.4.3 Ci IKKβ 的 5′-RACE | 第30-31页 |
| 2.4.4 Ci IKKβ 全长的拼接 | 第31-32页 |
| 2.4.5 Ci IKKβ 的系统进化分析 | 第32页 |
| 2.5 Ci IKKβ 表达水平分析 | 第32-33页 |
| 2.5.1 Ci IKKβ 组织表达水平的检测 | 第32页 |
| 2.5.2 Poly I:C刺激CIK细胞后Ci IKKβ 表达分析 | 第32-33页 |
| 2.6 Ci IKKβ 与Ci PKR的相互作用 | 第33-40页 |
| 2.6.1 免疫共沉淀检验Ci IKKβ 与Ci PKR相互作用 | 第33-37页 |
| 2.6.2 GST-pulldown确定Ci IKKβ 与Ci PKR相互作用 | 第37-40页 |
| 2.7 Ci IKKβ 与Ci IκBα 的相互作用 | 第40-42页 |
| 2.7.1 免疫共沉淀检验Ci IKKβ 与Ci IκBα 相互作用 | 第40-41页 |
| 2.7.2 GST-pulldown验证Ci IKKβ 与Ci IκBα 相互作用 | 第41-42页 |
| 2.8 草鱼NF-κB亚基Cip65, Cip105, Cic-Rel的克隆 | 第42-44页 |
| 2.8.1 Cip65, Cip105, Cic-Rel的同源克隆 | 第42页 |
| 2.8.2 Cip65, Cip105, Cic-Rel的 3′-RACE | 第42-43页 |
| 2.8.3 Cip65, Cip105, Cic-Rel的 5′-RACE | 第43-44页 |
| 2.8.4 Cip65, Cip105, Cic-Rel的全长拼接 | 第44页 |
| 2.8.5 Cip65, Cip105, Cic-Rel的系统进化分析 | 第44页 |
| 2.9 草鱼NF-κB亚基Cip65, Cip105, Cic-Rel表达水平分析 | 第44-45页 |
| 2.10 Cip65与Cip105, Cip50的相互作用 | 第45-47页 |
| 2.10.1 免疫共沉淀检验Cip65与Cip105, Cip50相互作用 | 第45-46页 |
| 2.10.2 GST-pulldown验证Cip65与Cip105, Cip50相互作用 | 第46-47页 |
| 2.11 Cip65, Cic-Rel与Ci IκBα 的相互作用 | 第47-48页 |
| 2.11.1 免疫共沉淀检验Cip65, Cic-Rel与Ci IκBα 的相互作用 | 第47-48页 |
| 2.11.2 GST-pulldown | 第48页 |
| 2.12 Cip65对Ci IκBα 与Cip105转录调控分析 | 第48-52页 |
| 2.12.1 Ci IκBα、Cip105转录起始位点的确定 | 第48-49页 |
| 2.12.2 Ci IκBα、Cip105启动子的克隆 | 第49-50页 |
| 2.12.3 Ci IκBα、Cip105启动子和Cip65的亲和性分析 | 第50-51页 |
| 2.12.4 Ci IκBα、Cip105的转录调控分析 | 第51-52页 |
| 2.13 Ci IKKβ 和Cip65多克隆抗体的制备及其性能鉴定 | 第52-53页 |
| 第三章 结果与分析 | 第53-102页 |
| 3.1 Ci IKKβ 的克隆和分析 | 第53-58页 |
| 3.1.1 Ci IKKβ 全长c DNA的克隆 | 第53页 |
| 3.1.2 Ci IKKβ 基因的序列分析 | 第53-56页 |
| 3.1.3 Ci IKKβ 基因的系统进化树 | 第56-58页 |
| 3.2 Ci IKKβ 基因的表达 | 第58-59页 |
| 3.2.1 Ci IKKβ 的组织表达 | 第58-59页 |
| 3.2.2 Ci IKKβ 在CIK细胞中的表达 | 第59页 |
| 3.3 Ci IKKβ 与Ci PKR的蛋白互作 | 第59-63页 |
| 3.3.1 真核表达载体p CMV-Ci IKKβ-FLAG的构建和鉴定 | 第59-60页 |
| 3.3.2 Ci IKKβ 与Ci PKR免疫共沉淀结果 | 第60-61页 |
| 3.3.3 融合蛋白的表达和纯化 | 第61-62页 |
| 3.3.4 GST-pulldown确定Ci IKKβ 与Ci PKR相互作用的结构域 | 第62-63页 |
| 3.4 Ci IKKβ 与Ci IκBα 的蛋白互作 | 第63-66页 |
| 3.4.1 真核表达载体p CS2-Ci IκBα-HA的构建和鉴定 | 第63-64页 |
| 3.4.2 Ci IKKβ 与Ci IκBα 免疫共沉淀结果 | 第64-65页 |
| 3.4.3 GST-pulldown确定Ci IKKβ 与Ci IκBα 相互作用 | 第65-66页 |
| 3.5 Cip65, Cip105, Cic-Rel的克隆和分析 | 第66-77页 |
| 3.5.1 Cip65, Cip105, Cic-Rel全长c DNA的克隆 | 第66-67页 |
| 3.5.2 Cip65、Cip105、Cic-Rel基因的序列分析 | 第67-74页 |
| 3.5.3 Cip65、Cip105、Cic-Rel基因的系统进化分析 | 第74-77页 |
| 3.6 Cip65、Cip105、Cic-Rel基因的表达 | 第77-82页 |
| 3.6.1 Cip65、Cip105、Cic-Rel在Poly I:C刺激后的组织表达 | 第77-80页 |
| 3.6.2 Cip65、Cip105、Cic-Rel在LPS刺激后的组织表达 | 第80-82页 |
| 3.7 Cip65与Cip105、Cip50的蛋白互作 | 第82-86页 |
| 3.7.1 p CMV-Cip65-FLAG、p CS2-Cip105-HA、p CS2-Cip50-HA载体的构建和鉴定 | 第82-83页 |
| 3.7.2 Cip65与Cip105、Cip50的免疫共沉淀结果 | 第83-85页 |
| 3.7.3 GST-pulldown确定Cip65与Cip105、Cip50的相互作用 | 第85-86页 |
| 3.8 Cip65、Cic-Rel与Ci IκBα 的蛋白互作 | 第86-90页 |
| 3.8.1 p CMV-Cic-Rel-FLAG载体的构建和鉴定 | 第86-87页 |
| 3.8.2 Cip65、Cic-Rel与Ci IκBα 的免疫共沉淀结果 | 第87-89页 |
| 3.8.3 GST-pulldown确定Cip65、Cic-Rel与Ci IκBα 的相互作用 | 第89-90页 |
| 3.9 Cip65对Ci IΚBα 与Cip105的转录调控 | 第90-95页 |
| 3.9.1 Ci IκBα、Cip105 c DNA 5′末端序列的获得 | 第90-91页 |
| 3.9.2 Ci IκBα 启动子的克隆和序列分析 | 第91-93页 |
| 3.9.3 Cip105启动子的克隆和序列分析 | 第93-95页 |
| 3.10 Ci IκBα、Cip105启动子和Cip65的亲和性分析 | 第95-97页 |
| 3.10.1 Cip65全长及截断蛋白的原核表达和纯化 | 第95-96页 |
| 3.10.2 Ci IκBα、Cip105启动子和Cip65的非放射性凝胶阻滞分析 | 第96-97页 |
| 3.11 Cip65激活Ci IκBα、Cip105启动子活性分析 | 第97-100页 |
| 3.11.1 Ci IκBα、Cip105启动子活性分析 | 第97-98页 |
| 3.11.2 Cip65调控Ci IκBα、Cip105的转录 | 第98-100页 |
| 3.12 WB测定Ci IKKβ 和Cip65多抗血清的特异性 | 第100-102页 |
| 第四章 讨论 | 第102-113页 |
| 4.1 Ci PKR介导的NF-κB信号通路 | 第102-103页 |
| 4.2 草鱼NF-κB经典信号通路的进化保守性 | 第103-105页 |
| 4.3 草鱼NF-κB经典信号通路参与免疫反应 | 第105-111页 |
| 4.4 草鱼NF-κB经典信号通路的负反馈调节作用 | 第111-113页 |
| 第五章 主要结论、创新点及研究展望 | 第113-115页 |
| 5.1 主要结论 | 第113页 |
| 5.1.1 Ci IKKβ，Cip65，Cip105和Cic-Rel的克隆和表达分析 | 第113页 |
| 5.1.2 Ci PKR介导NF-κB信号通路的机制初步分析 | 第113页 |
| 5.1.3 草鱼NF-κB经典信号通路的研究 | 第113页 |
| 5.1.4 草鱼NF-κB经典信号通路的负反馈调节分析 | 第113页 |
| 5.2 创新点 | 第113-114页 |
| 5.3 研究展望 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-132页 |
| 附录 缩略语 | 第132-134页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第134页 |
