| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第10-11页 |
| 1. 前言 | 第11-22页 |
| 引言 | 第11页 |
| 1.1 伪狂犬病毒的分子生物学特征 | 第11-12页 |
| 1.2 伪狂犬病毒的致病机理 | 第12-15页 |
| 1.3 PRV病毒UL21基因的相关研究 | 第15-17页 |
| 1.4 细菌人工染色体技术 | 第17-19页 |
| 1.5 Red/ET同源重组技术 | 第19-20页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 2. 材料与方法 | 第22-38页 |
| 2.1 材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 质粒、病毒、细胞、菌种和抗体 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要溶液及培养基的配制 | 第23-25页 |
| 2.1.4 寡核苷酸引物 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-38页 |
| 2.2.1 从DH10B菌株中提取pPRV-Ea质粒 | 第25-27页 |
| 2.2.2 制作GS1783电转感受态 | 第27-28页 |
| 2.2.3 pPRV Ea质粒电转化GS1783电转感受态 | 第28页 |
| 2.2.4 转染PK-15 细胞验证阳性克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.5 利用Red重组技术构建PRV UL21缺失突变株 | 第29-33页 |
| 2.2.6 利用Red重组技术构建PRV UL21回复突变株 | 第33-34页 |
| 2.2.7 Western Blot验证UL21蛋白的表达 | 第34-35页 |
| 2.2.8 SYBR Green I荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 2.2.9 rPRV-ΔUL21与野生型PRV的生物学特性比较 | 第36-38页 |
| 3. 结果与分析 | 第38-47页 |
| 3.1 转染PK-15 细胞验证GS1783中pPRV Ea感染性 | 第38页 |
| 3.2 构建rPRV-ΔUL21重组病毒 | 第38-42页 |
| 3.2.1 以pEPKan-S2为模板PCR扩增Kan表达盒 | 第38-39页 |
| 3.2.2 第一轮Red重组的结果验证 | 第39页 |
| 3.2.3 第二轮Red重组的结果验证 | 第39-42页 |
| 3.3 构建rPRV-ΔUL21R | 第42-44页 |
| 3.3.1 第一轮Red重组验证结果 | 第42-43页 |
| 3.3.2 第二轮Red重组的结果验证 | 第43-44页 |
| 3.4 western blot验证UL21缺失情况 | 第44-45页 |
| 3.5 UL21的缺失对空斑大小的影响 | 第45页 |
| 3.6 qRT-PCR验证CTO-L表达水平的变化 | 第45-47页 |
| 4. 讨论与结论 | 第47-52页 |
| 4.1 采用重新构建的BAC系统的原因 | 第47-48页 |
| 4.2 BAC基因编辑平台的稳定性和效率 | 第48-49页 |
| 4.3 UL21的缺失对于CTO-L的影响 | 第49-50页 |
| 4.4 利用细菌人工染色体构建重组毒的优劣势 | 第50页 |
| 4.5 UL21基因缺失对PRV生长的影响 | 第50-51页 |
| 4.6 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
