| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第14-23页 |
| 1.1.1 喹赛多研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.2 核内不均一核糖核蛋白A2/B1研究进展 | 第16-19页 |
| 1.1.3 药物小分子与蛋白质相互作用关系的研究方法 | 第19-23页 |
| 1.2 研究思路 | 第23-24页 |
| 1.3 研究内容 | 第24页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-54页 |
| 2.1 细胞株 | 第25页 |
| 2.2 药品和试剂 | 第25-28页 |
| 2.3 主要仪器和设备 | 第28-29页 |
| 2.4 溶液配制 | 第29-31页 |
| 2.5 L-02 细胞的复苏、培养、传代与冻存 | 第31-32页 |
| 2.6 野生型pET28a-hnRNP A2/B1及突变质粒的构建 | 第32-41页 |
| 2.6.1 细胞处理及分组 | 第32页 |
| 2.6.2 细胞总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.6.3 细胞总RNA纯度、浓度及完整性的检测 | 第33页 |
| 2.6.4 逆转录反应 | 第33-34页 |
| 2.6.5 普通PCR扩增目的基因 | 第34-36页 |
| 2.6.6 hnRNP A2/B1与表达载体pET28a的连接 | 第36-40页 |
| 2.6.7 突变质粒的构建 | 第40-41页 |
| 2.7 野生型hnRNP A2/B1及突变蛋白的表达 | 第41-46页 |
| 2.7.1 蛋白表达最佳条件的摸索与可溶性分析 | 第41-43页 |
| 2.7.2 蛋白浓度的测定 | 第43-44页 |
| 2.7.3 SDS-PAGE电泳 | 第44-45页 |
| 2.7.4 Western Blot免疫印迹 | 第45-46页 |
| 2.8 野生型hnRNP A2/B1及突变蛋白的纯化 | 第46-48页 |
| 2.8.1 His-tag亲和Ni柱纯化目的蛋白 | 第46-47页 |
| 2.8.2 蛋白质的透析和浓缩 | 第47-48页 |
| 2.9 表面等离子体共振实验（SPR） | 第48页 |
| 2.10 RNAi技术抑制hnRNP A2/B1的表达 | 第48-52页 |
| 2.10.1 siRNA干扰片段的设计与合成 | 第48-49页 |
| 2.10.2 检测转染效率-转染荧光标记的siRNA(FAM-siRNA) | 第49-50页 |
| 2.10.3 转染条件的优化 | 第50页 |
| 2.10.4 hnRNP A2/B1-siRNA转染L-02 细胞 | 第50页 |
| 2.10.5 qRT-PCR检测hnRNP A2/B1 mRNA的表达水平 | 第50-51页 |
| 2.10.6 细胞总蛋白的提取 | 第51-52页 |
| 2.10.7 Western Blot免疫印迹检测hnRNP A2/B1蛋白的表达 | 第52页 |
| 2.11 喹赛多作用及hnRNP A2/B1干扰对细胞产生的影响 | 第52-53页 |
| 2.11.1 细胞处理及分组 | 第52页 |
| 2.11.2 qRT-PCR检测hnRNP A2/B1及细胞增殖相关基因的表达水平 | 第52-53页 |
| 2.11.3 Western Blot免疫印迹检测hnRNP A2/B1蛋白的表达 | 第53页 |
| 2.12 数据处理 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-72页 |
| 3.1 L-02 细胞的生长状态 | 第54页 |
| 3.2 细胞总RNA的质量检测结果 | 第54-55页 |
| 3.3 原核表达质粒的构建 | 第55-58页 |
| 3.3.1 目的基因的扩增 | 第55-56页 |
| 3.3.2 野生型及突变质粒的浓度和质量 | 第56页 |
| 3.3.3 野生型及突变质粒测序结果 | 第56-58页 |
| 3.4 野生型及突变蛋白的原核表达 | 第58-61页 |
| 3.4.1 蛋白表达最佳诱导条件 | 第58-60页 |
| 3.4.2 Western Blot验证目的蛋白 | 第60-61页 |
| 3.5 野生型及突变蛋白的纯化 | 第61-63页 |
| 3.5.1 蛋白纯化最佳洗脱条件 | 第61-62页 |
| 3.5.2 野生型及突变蛋白浓度的检测 | 第62页 |
| 3.5.3 Western Blot免疫印迹验证结果 | 第62-63页 |
| 3.6 喹赛多与野生型及突变蛋白的相互作用检测结果 | 第63-66页 |
| 3.7 喹赛多及hnRNP A2/B1的干扰对细胞的影响 | 第66-72页 |
| 3.7.1 引物可靠性验证 | 第66-67页 |
| 3.7.2 干扰条件的确定 | 第67-70页 |
| 3.7.3 喹赛多及hnRNP A2/B1的干扰对细胞增殖相关基因表达的影响 | 第70-72页 |
| 4 讨论 | 第72-78页 |
| 4.1 纯化方法对蛋白纯化结果的影响 | 第72-73页 |
| 4.2 喹赛多和hnRNP A2/B1的结合特性 | 第73-75页 |
| 4.3 喹赛多通过hnRNP A2/B1介导细胞增殖相关基因的表达 | 第75-78页 |
| 5 全文总结 | 第78-79页 |
| 6 文献综述 | 第79-88页 |
| 参考文献 | 第88-105页 |
| 附录I | 第105-110页 |
| 附录II | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
