| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 多酚氧化酶的研究现状 | 第13-15页 |
| 1.1.1 多酚氧化酶的分子结构 | 第13页 |
| 1.1.2 多酚氧化酶基因和表达特性 | 第13-14页 |
| 1.1.3 多酚氧化酶在酚类代谢中的作用 | 第14-15页 |
| 1.2. 酶促褐变及其控制 | 第15页 |
| 1.2.1 采用 PPO 酶抑制剂 | 第15页 |
| 1.2.2 基因工程技术 | 第15页 |
| 1.3. RNA 干扰 | 第15-22页 |
| 1.3.1 RNA 干扰的发展史 | 第15-16页 |
| 1.3.2 siRNA 的沉默机制 | 第16页 |
| 1.3.3 miRNA 的发现 | 第16-17页 |
| 1.3.4 miRNA 及其在动植物中的生物合成 | 第17页 |
| 1.3.5 miRNA 的沉默机制 | 第17-18页 |
| 1.3.6 人造 microRNA 工程 | 第18-20页 |
| 1.3.7 植物中 amiRNA 干扰技术的应用 | 第20-22页 |
| 1.4 本文研究内容、目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 马铃薯组织间看家基因的筛选和多酚氧化酶基因的表达测定 | 第24-44页 |
| 摘要 | 第24页 |
| 2.1 研究背景 | 第24-26页 |
| 2.2 材料和方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 材料 | 第26页 |
| 2.2.2 总 RNA 的提取、提纯和第一条链 cDNA 的合成 | 第26页 |
| 2.2.3 RT-qPCR 引物设计 | 第26-27页 |
| 2.2.4 RT-qPCR 反应体系的制备 | 第27页 |
| 2.2.5 标准曲线的制作 | 第27页 |
| 2.2.6 PCR 扩增效率 | 第27页 |
| 2.2.7 统计分析 | 第27页 |
| 2.2.8 马铃薯中 PPO 类似基因的检索 | 第27-28页 |
| 2.3 结果 | 第28-41页 |
| 2.3.1 马铃薯看家基因稳定性的测试 | 第28-30页 |
| 2.3.2 马铃薯看家基因的定量分析 | 第30-34页 |
| 2.3.3 马铃薯基因组中 PPO 的类似基因 | 第34页 |
| 2.3.4 PPO 引物的选择 | 第34-35页 |
| 2.3.5 马铃薯 PPO 基因表达 | 第35-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-42页 |
| 2.5 结论 | 第42-44页 |
| 第三章 采用 amiRNA 技术抑制马铃薯多酚氧化酶基因表达的研究 | 第44-68页 |
| 摘要 | 第44页 |
| 3.1 研究背景 | 第44-45页 |
| 3.2 材料和方法 | 第45-52页 |
| 3.2.1 amiRNA 载体构建 | 第45-47页 |
| 3.2.2 植株的基因转化 | 第47页 |
| 3.2.3 RT-qPCR 分析 PPO 基因表达 | 第47-49页 |
| 3.2.4 RT-PCR 检测 amiRNA | 第49页 |
| 3.2.5 amiRNA 剪切位点的检测 | 第49-50页 |
| 3.2.6 PPO 蛋白水平的分析 | 第50-51页 |
| 3.2.7 PPO 酶活性测定 | 第51页 |
| 3.2.8 褐变潜力的测定 | 第51页 |
| 3.2.9 统计分析 | 第51-52页 |
| 3.3 结果 | 第52-65页 |
| 3.3.1 转基因株系的筛选和继代 | 第52-57页 |
| 3.3.2 转基因马铃薯中 PPO 基因的表达 | 第57页 |
| 3.3.3 转基因马铃薯块茎的 PPO 蛋白水平 | 第57页 |
| 3.3.4 转基因马铃薯块茎的 PPO 酶活力 | 第57-60页 |
| 3.3.5 转基因马铃薯块茎的褐变潜力和褐变表型 | 第60-61页 |
| 3.3.6 统计分析 | 第61-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-67页 |
| 3.5 结论 | 第67-68页 |
| 第四章 瞬时表达系统可快速筛选稳定表达的 amiRNA 载体 | 第68-80页 |
| 摘要 | 第68页 |
| 4.1 研究背景 | 第68-69页 |
| 4.2 材料和方法 | 第69-72页 |
| 4.2.1 amiRNA 载体构建 | 第69-70页 |
| 4.2.2 农杆菌侵染本生烟 | 第70页 |
| 4.2.3 基因转化 | 第70页 |
| 4.2.4 amiRNA 表达分析（RNA Northern Blot 法） | 第70-71页 |
| 4.2.5 amiRNA 表达分析（RT-PCR 法） | 第71-72页 |
| 4.3 结果 | 第72-78页 |
| 4.3.1 amiRNA 载体构建 | 第72-73页 |
| 4.3.2 amiRPPO1，amiRPPO2，amiRPPO3 和 amiRPPO234 在本生烟中的瞬时表达和马铃薯中的稳定表达 | 第73页 |
| 4.3.3 amiRPNR1 和 amiRPNR2 在本生烟中的瞬时表达和转基因本生烟中稳定表达 | 第73-78页 |
| 4.4 讨论 | 第78-79页 |
| 4.5 结论 | 第79-80页 |
| 全文结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-90页 |
| 附录 | 第90-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 作者简介 | 第106页 |
