| 缩略词表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 第一部分 分子动力学模拟分析双特异抗体结构稳定性 | 第16-23页 |
| 材料与方法 | 第16-19页 |
| 1. 实验材料 | 第16页 |
| 2. 方法 | 第16-19页 |
| 2.1 抗体结构预处理 | 第16页 |
| 2.2 抗体结构能量最小化 | 第16-17页 |
| 2.3 抗体CH3结构体系的升温 | 第17页 |
| 2.4 抗体CH3结构体系的平衡 | 第17页 |
| 2.5 抗体CH3结构体系的长时间尺度动力学模拟 | 第17-19页 |
| 结果 | 第19-22页 |
| 1. 抗体CH3 wt和KIH在355K下结构稳定性分析 | 第19-20页 |
| 2. 抗体CH3 wt和KIH在355K下氨基酸波动性分析 | 第20-22页 |
| 讨论 | 第22-23页 |
| 第二部分 靶向EGFR和PD1分子的双特异抗体的设计和构建 | 第23-47页 |
| 材料与方法 | 第23-33页 |
| 1. 实验材料 | 第23-24页 |
| 1.1 菌株与细胞株 | 第23页 |
| 1.2 载体与质粒 | 第23页 |
| 1.3 常用分子生物学试剂盒 | 第23页 |
| 1.4 DNA标准分子Marker | 第23页 |
| 1.5 其他分子生物学试剂和化学试剂 | 第23页 |
| 1.6 主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 2. 方法 | 第24-33页 |
| 2.1 EGFR和PD1分子的双特异抗体的结构的设计 | 第24页 |
| 2.2 EGFR和PD1分子的双特异抗体的重链、轻链的构建策略 | 第24-27页 |
| 2.2.1 EGFR分子抗体(Cetuximab,C225)的重链和knob结构的构建方法 | 第24-25页 |
| 2.2.2 EGFR分子抗体(Cetuximab,C225)的轻链的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.3 PD1分子抗体(Nivolumab,5C4)的重链和hole的构建方法 | 第26-27页 |
| 2.2.4 PD1分子抗体(Nivolumab,5C4)轻链的构建方法 | 第27页 |
| 2.3 分子克隆构建中用到的Overlap PCR体系设计及引物设计序列 | 第27-28页 |
| 2.4 酶切体系及步骤 | 第28-29页 |
| 2.5 酶切/PCR产物琼脂糖凝胶DNA回收 | 第29-30页 |
| 2.6 酶切产物和PCR回收产物与载体的连接 | 第30页 |
| 2.6.1 与克隆载体连接 | 第30页 |
| 2.6.2 与表达载体连接 | 第30页 |
| 2.7 转化 | 第30-31页 |
| 2.7.1 感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.7.2 LB液与LB板的制备 | 第31页 |
| 2.7.3 转化步骤 | 第31页 |
| 2.8 质粒重组与筛选 | 第31-32页 |
| 2.9 测序鉴定序列 | 第32-33页 |
| 结果 | 第33-46页 |
| 1. 双特异性抗体Cetu-PD1 CrossMab的构建 | 第33-46页 |
| 1.1 EGFR分子抗体(Cetuximab,C225)的重链和knob结构的构建 | 第33-36页 |
| 1.2 EGFR分子抗体(Cetuximab,C225)的轻链的构建 | 第36-38页 |
| 1.3 PD1分子抗体(Nivolumab,5C4)的重链和hole的构建 | 第38-43页 |
| 1.4 PD1分子抗体(Nivolumab,5C4)轻链的构建 | 第43-46页 |
| 讨论 | 第46-47页 |
| 第三部分 靶向EGFR和PD1分子的双特异抗体的转染与表达 | 第47-53页 |
| 材料与方法 | 第47-51页 |
| 1. 实验材料 | 第47页 |
| 1.1 菌株与细胞株 | 第47页 |
| 1.2 常用分子生物学试剂盒 | 第47页 |
| 1.3 蛋白标准分子Marker | 第47页 |
| 1.4 其他分子生物学试剂和化学试剂 | 第47页 |
| 1.5 抗体 | 第47页 |
| 1.6 主要实验仪器 | 第47页 |
| 2. 方法 | 第47-51页 |
| 2.1 抗体转染 | 第47-48页 |
| 2.1.1 10μM线性聚乙烯亚胺PEI的配置 | 第47-48页 |
| 2.1.2 细胞准备 | 第48页 |
| 2.1.3 双特异抗体重轻链共转染到Freestyle TM 293F细胞 | 第48页 |
| 2.2 分析抗体分子量大小及完整性 | 第48-51页 |
| 2.2.1 SDS-PAGE的配置和考马斯亮蓝染色 | 第48-49页 |
| 2.2.2 抗体的纯化 | 第49页 |
| 2.2.3 抗体的表达点膜初步鉴定 | 第49-51页 |
| 结果 | 第51-52页 |
| 1. Cetu-PD1 CrossMab双特异性抗体的表达及分子鉴定 | 第51-52页 |
| 1.1 Cetu-PD1 CrossMab双特异性抗体的表达 | 第51页 |
| 1.2 Cetu-PD1 CrossMab双特异性抗体表达的初步鉴定：点膜实验 | 第51页 |
| 1.3 通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色来鉴定表达抗体的分子大小及结构完整性 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 文献综述 免疫检测点治疗在肺癌中的研究进展 | 第59-69页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
