| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| ·细菌耐药性 | 第11-14页 |
| ·细菌耐药性的产生 | 第11-12页 |
| ·为什么关注耐药性 | 第12页 |
| ·抗菌剂的作用方式 | 第12页 |
| ·细菌耐药性的产生机制 | 第12-13页 |
| ·新的抗菌药物研发策略 | 第13-14页 |
| ·金黄色葡萄球菌表面蛋白 | 第14-15页 |
| ·表面蛋白的功能 | 第15页 |
| ·表面蛋白的结构 | 第15页 |
| ·分选酶 | 第15-22页 |
| ·分选酶的分类 | 第16-17页 |
| ·分选酶的主要功能 | 第17-18页 |
| ·分选酶A 的三维结构 | 第18-19页 |
| ·分选酶A 的作用机制 | 第19-20页 |
| ·分选酶在细菌毒性中的作用 | 第20页 |
| ·SrtA 的抑制剂筛选 | 第20-22页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第22-23页 |
| ·酵母表面展示系统 | 第23页 |
| ·本课题的研究背景、意义及研究内容 | 第23-26页 |
| ·研究背景及意义 | 第23页 |
| ·研究内容 | 第23-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 重组质粒pET32a-SrtA_(_(△N24))及pET32a-SrtA_(△N59)的构建 | 第26-42页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·菌种与质粒 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·主要设备 | 第27-28页 |
| ·培养基，抗生素以及常用溶液的配制 | 第28-29页 |
| ·主要方法 | 第29-35页 |
| ·重组质粒pMD20-SrtA 的提取及双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·引物的设计与合成 | 第30-31页 |
| ·SrtA_(△N24) 及SrtA_(△N59) 基因的扩增 | 第31页 |
| ·PCR 产物的乙醇沉淀 | 第31-32页 |
| ·pET32a (+)载体的提取与单酶切鉴定 | 第32页 |
| ·限制性双酶切 | 第32-33页 |
| ·切胶回收 | 第33-34页 |
| ·重组表达载体pET32a-SrtA_(△N24) 和pET32a-SrtA_(△N59) 构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·重组质粒pMD20-srtA 的提取及双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·SrtA_(△N24) 及SrtA_(△N59) 基因的扩增 | 第36页 |
| ·pET32a（+）载体的提取与单酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组表达载体的菌落PCR 和双酶切鉴定 | 第37页 |
| ·测序结果分析 | 第37-39页 |
| ·讨论与分析 | 第39-41页 |
| ·引物的设计与合成 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 重组质粒pET32a-SrtA_(△N24)及pET32a-SrtA_(△N59)表达及诱导条件优化 | 第42-51页 |
| ·材料 | 第42-44页 |
| ·质粒与实验菌株 | 第42页 |
| ·主要生化试剂 | 第42页 |
| ·实验设备 | 第42-43页 |
| ·培养基，以及常用溶液的配制 | 第43-44页 |
| ·方法与步骤 | 第44-46页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)感受态的制备 | 第44页 |
| ·重组质粒pET32a-SrtA_(△N24) 和pET32a-SrtA_(△N59) 的转化 | 第44页 |
| ·重组载体的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第45页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第45-46页 |
| ·目的蛋白诱导条件的优化 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-49页 |
| ·重组载体在IPTG 的诱导下表达 | 第46-47页 |
| ·目的蛋白诱导条件的优化 | 第47-49页 |
| ·讨论与分析 | 第49-50页 |
| ·超声破碎裂解细胞 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的表达 | 第50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 重组蛋白的分离纯化及活性测定 | 第51-64页 |
| ·材料 | 第51-53页 |
| ·菌株和质粒 | 第51页 |
| ·主要生化试剂 | 第51-52页 |
| ·实验设备 | 第52页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·目的蛋白的亲和层析 | 第53-54页 |
| ·目的蛋白的Western Blot 检测 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pKFS-QALPETGEE-EGFP 在毕赤酵母中的诱导表达 | 第55页 |
| ·重组蛋白活性的测定 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-60页 |
| ·目的蛋白的亲和层析 | 第56-57页 |
| ·重组蛋白的蛋白印迹检测 | 第57-58页 |
| ·重组质粒pKFS-QALPETGEE-EGFP 在毕赤酵母中的诱导表达 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白活性的测定 | 第59-60页 |
| ·讨论与分析 | 第60-63页 |
| ·亲和层析纯化目的蛋白 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白的蛋白印迹检测 | 第61页 |
| ·增强型绿色荧光蛋白（EGFP） | 第61-62页 |
| ·荧光分光光度计法测定荧光强度 | 第62页 |
| ·重组蛋白活性的测定 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附件 | 第75页 |
