| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 前沿综述 | 第8-17页 |
| 1.1 太平洋鳕研究综述 | 第8-9页 |
| 1.1.1 太平洋鳕简介 | 第8页 |
| 1.1.2 鳕科研究现状 | 第8-9页 |
| 1.2 抗冻蛋白研究进展 | 第9-14页 |
| 1.2.1 抗冻蛋白特性 | 第9-10页 |
| 1.2.2 抗冻蛋白的种类及结构 | 第10-14页 |
| 1.2.3 抗冻蛋白的应用 | 第14页 |
| 1.3 高通量测序技术研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第15-17页 |
| 第二章 太平洋鳕肝组织转录组测序及分析 | 第17-27页 |
| 2.1 材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第17页 |
| 2.1.2 试剂及仪器 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-21页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 太平洋鳕肝组织转录组测序 | 第19页 |
| 2.2.3 生物信息分析流程 | 第19-21页 |
| 2.3 结果与分析 | 第21-24页 |
| 2.3.1 总RNA提取 | 第21页 |
| 2.3.2 Illumina测序结果分析 | 第21-22页 |
| 2.3.3 太平洋鳕转录组功能注释与分类 | 第22-23页 |
| 2.3.4 太平洋鳕AFGP基因信息 | 第23-24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-27页 |
| 第三章 太平洋鳕抗冻基因AFP‐Ⅳ的克隆及表达分析 | 第27-38页 |
| 3.1 材料 | 第27-29页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第27页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.3 仪器和设备 | 第28页 |
| 3.1.4 溶液的配制 | 第28-29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 3.2.1 总RNA提取 | 第29页 |
| 3.2.2 反转录 | 第29页 |
| 3.2.3 太平洋鳕AFP‐Ⅳ基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| 3.2.4 PCR产物的纯化回收 | 第30页 |
| 3.2.5 PCR产物与载体的连接转化 | 第30-31页 |
| 3.2.6 阳性克隆序列测定 | 第31页 |
| 3.2.7 生物信息学分析 | 第31页 |
| 3.2.8 太平洋鳕抗冻基因AFP‐IV的相对荧光定量 | 第31-32页 |
| 3.3 结果 | 第32-36页 |
| 3.3.1 总RNA提取 | 第32-33页 |
| 3.3.2 太平洋鳕抗冻基因AFP‐IV克隆及生物信息学分析 | 第33-35页 |
| 3.3.3 太平洋鳕抗冻基因AFPⅣ的组织及发育表达差异分析 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 太平洋鳕抗冻基因AFP‐IV的原核表达及条件优化 | 第38-49页 |
| 4.1 材料 | 第38-39页 |
| 4.1.1 主要试剂及菌株 | 第38页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第38-39页 |
| 4.1.3 试剂配制 | 第39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-42页 |
| 4.2.1 AFP‐IV基因的原核表达 | 第39-41页 |
| 4.2.2 重组菌pET‐32a‐AFP‐IV‐BL21的诱导表达及可溶性分析 | 第41-42页 |
| 4.2.3 重组蛋白质谱鉴定 | 第42页 |
| 4.2.4 重组菌pET‐32a‐AFP‐IV‐BL21的原核表达条件优化 | 第42页 |
| 4.3 实验结果及分析 | 第42-47页 |
| 4.3.1 重组载体的构建与鉴定 | 第42-44页 |
| 4.3.2 重组蛋白的表达与鉴定 | 第44-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 兔抗太平洋鳕AFP‐IV多克隆抗体制备及抗冻效果分析 | 第49-58页 |
| 5.1 材料 | 第49-51页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第49页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第49-50页 |
| 5.1.4 主要溶液配制 | 第50-51页 |
| 5.2 实验方法 | 第51-53页 |
| 5.2.1 融合蛋白的纯化与浓度测定 | 第51页 |
| 5.2.2 太平洋鳕多克隆抗体制备 | 第51-52页 |
| 5.2.3 抗体效价检测 | 第52-53页 |
| 5.2.4 Western‐blot分析 | 第53页 |
| 5.2.5 抗冻蛋白活性分析 | 第53页 |
| 5.3 结果 | 第53-56页 |
| 5.3.1 融合蛋白的纯化与浓度测定 | 第53-54页 |
| 5.3.2 抗体效价检测特异性分析 | 第54-55页 |
| 5.3.3 抗冻效果分析 | 第55-56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-58页 |
| 结论与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 攻读硕士期间发表论文目录 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
