| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 文献综述 | 第11-23页 |
| 第一章 BHD综合征 | 第11-18页 |
| 1.1 BHD综合征的临床症状 | 第11-12页 |
| 1.1.1 多发性纤维毛囊瘤 | 第11页 |
| 1.1.2 自发性气胸 | 第11页 |
| 1.1.3 肾癌 | 第11页 |
| 1.1.4 其他恶性肿瘤 | 第11-12页 |
| 1.2 BHD综合征基因：FLCN研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.1 BHD综合征基因的发现 | 第12页 |
| 1.2.2 BHD综合征中FLCN的突变 | 第12-13页 |
| 1.2.3 FLCN是一个抑癌基因 | 第13页 |
| 1.3 FLCN与其结合蛋白 | 第13-15页 |
| 1.3.1 FLCN基因 | 第13-14页 |
| 1.3.2 FLCN结合蛋白 | 第14-15页 |
| 1.4 FLCN参与的信号通路 | 第15-18页 |
| 1.4.1 mTOR信号通路 | 第15-16页 |
| 1.4.2 HIF信号通路 | 第16页 |
| 1.4.3 细胞自吞噬 | 第16页 |
| 1.4.4 Ras-Raf-MEK-Erk信号通路和rRNA合成 | 第16-17页 |
| 1.4.5 膜运输 | 第17页 |
| 1.4.6 干细胞维持和多能性 | 第17-18页 |
| 第二章 mTORC1信号通路的研究进展 | 第18-23页 |
| 2.1 氨基酸介导的mTORC1信号通路上的主要成分 | 第18-20页 |
| 2.1.1 Rag GTPases | 第18-19页 |
| 2.1.2 Ragulator复合物 | 第19页 |
| 2.1.3 v-ATPase | 第19-20页 |
| 2.1.4 其它成分 | 第20页 |
| 2.2 溶酶体是mTORC1激活的关键位置 | 第20-23页 |
| 研究背景 | 第23-24页 |
| 试验研究 | 第24-51页 |
| 第三章 高表达FLCN使得细胞在外界氨基酸水平较低时仍能维持较高的mTORC1活性 | 第24-38页 |
| 3.1 材料 | 第24-25页 |
| 3.1.1 细胞株、载体和菌株 | 第24页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 3.1.3 试验仪器 | 第25页 |
| 3.2 方法 | 第25-33页 |
| 3.2.1 FLCN真核表达载体的构建 | 第25-28页 |
| 3.2.2 稳定表达FLCN-HA蛋白细胞株建立 | 第28-31页 |
| 3.2.3 高表达FLCN基因对细胞mTORC1信号通路活性的影响 | 第31-32页 |
| 3.2.4 高表达FLCN基因使得细胞对Leu敏感性的变化 | 第32-33页 |
| 3.3 试验结果 | 第33-36页 |
| 3.3.1 FLCN-HA-pcDNA3.1(+) 重组载体的酶切鉴定 | 第33页 |
| 3.3.2 FLCN-HA-pcDNA3.1(+)重组载体的测序结果 | 第33页 |
| 3.3.3 稳定表达FLCN-HA蛋白细胞株的细胞免疫荧光鉴定和Western blot鉴定结果 | 第33-34页 |
| 3.3.4 过表达FLCN引起细胞对于外界氨基酸水平敏感性降低 | 第34-35页 |
| 3.3.5 过表达FLCN引起细胞对外界L-Leucine敏感性降低 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-37页 |
| 3.5 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 高表达PAT1抑制mTORC1信号通路 | 第38-45页 |
| 4.1 材料 | 第38-39页 |
| 4.1.1 细胞株和载体 | 第38页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 4.1.3 试验仪器 | 第38-39页 |
| 4.2 方法 | 第39-41页 |
| 4.2.1 PAT1真核过表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 4.2.2 稳定表达GFP-PAT1蛋白细胞株的建立 | 第40-41页 |
| 4.2.3 高表达PAT1蛋白对细胞mTORC1信号通路的影响 | 第41页 |
| 4.3 试验结果 | 第41-44页 |
| 4.3.1 PAT1-pEGFP-C1重组载体的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 4.3.2 PAT1-pEGFP-C1重组载体的测序结果 | 第42页 |
| 4.3.3 稳定表达GFP-PAT1蛋白细胞株的细胞免疫荧光鉴定和Western blot鉴定结果 | 第42-43页 |
| 4.3.4 PAT1抑制mTORC1活性 | 第43-44页 |
| 4.4 讨论 | 第44页 |
| 4.5 小结 | 第44-45页 |
| 第五章 FLCN与PAT1相互拮抗调节mTORC1 | 第45-51页 |
| 5.1 材料 | 第45-46页 |
| 5.1.1 细胞株和载体 | 第45页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 5.1.3 试验仪器 | 第45-46页 |
| 5.2 方法 | 第46-48页 |
| 5.2.1 过表达PAT1蛋白对高表达FLCN细胞的mTORC1信号通路的影响 | 第46-47页 |
| 5.2.2 过表达FLCN蛋白和高浓度亮氨酸对高表达PAT1细胞的mTORC1信号通路的影响 | 第47页 |
| 5.2.3 FLCN干扰对PAT1干扰细胞的mTORC1信号通路的影响 | 第47-48页 |
| 5.3 试验结果 | 第48-50页 |
| 5.3.1 过表达PAT1抑制高表达FLCN对细胞的mTORC1信号通路的影响 | 第48-49页 |
| 5.3.2 过表达FLCN和高浓度亮氨酸都能拮抗高表达PAT1对细胞的作用 | 第49页 |
| 5.3.3 同时抑制FLCN可以拮抗抑制PAT1对细胞mTORC1信号通路的作用 | 第49-50页 |
| 5.4 讨论 | 第50页 |
| 5.5 小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
