| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-32页 |
| 1.1 鱼类疫苗 | 第14-18页 |
| 1.1.1 鱼类疫苗的种类 | 第14-16页 |
| 1.1.2 鱼类疫苗的接种方式 | 第16-17页 |
| 1.1.3 细菌载体疫苗的优点与隐患 | 第17-18页 |
| 1.2 细菌的群体感应系统 | 第18-23页 |
| 1.2.1 以费氏弧菌luxI-luxR为代表的革兰氏阴性菌的群体感应系统 | 第18-20页 |
| 1.2.2 luxI-luxR型群体感应的特异性 | 第20页 |
| 1.2.3 以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌的群体感应系统 | 第20-23页 |
| 1.2.4 其他类型的群体感应系统 | 第23页 |
| 1.3 群体感应系统的抑制——群体淬灭系统 | 第23-25页 |
| 1.3.1 原核生物的群体淬灭机制 | 第24页 |
| 1.3.2 典型的AHL-内酯酶AiiA的群体淬灭机理 | 第24-25页 |
| 1.3.3 真核生物对群体感应的抑制 | 第25页 |
| 1.4 群体感应系统在生物工程中的应用 | 第25-27页 |
| 1.4.1 群体感应的合成生物学回路 | 第25-26页 |
| 1.4.2 群体感应回路作为生物传感器 | 第26-27页 |
| 1.4.3 防止生物淤积 | 第27页 |
| 1.5 细菌的摄铁系统 | 第27-29页 |
| 1.5.1 微生物体内金属离子平衡的建立 | 第27-28页 |
| 1.5.2 铁摄取调控子的基本特性 | 第28页 |
| 1.5.3 铁摄取调控子的DNA结合位点 | 第28-29页 |
| 1.5.4 Fur蛋白与致病和群体感应系统的关系 | 第29页 |
| 1.6 本论文的主要内容和意义 | 第29-32页 |
| 第2章 细菌密度依赖的一元调控表达系统的构建与功能 | 第32-48页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 实验材料 | 第32-34页 |
| 2.2.1 药品与试剂 | 第32页 |
| 2.2.2 仪器及技术服务 | 第32页 |
| 2.2.3 菌株、质粒以及引物 | 第32-34页 |
| 2.2.4 培养基和其他溶液配方 | 第34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-38页 |
| 2.3.1 细菌密度依赖的一元调控表达系统的构建 | 第34-36页 |
| 2.3.2 一元调控表达系统随时间的表达水平检测 | 第36-37页 |
| 2.3.3 一元调控表达系统随细菌密度变化的表达特性检测 | 第37页 |
| 2.3.4 一元调控表达系统的广宿主特性检测 | 第37-38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-46页 |
| 2.4.1 细菌密度依赖的一元调控表达系统的构建 | 第38-41页 |
| 2.4.2 一元调控表达系统随时间的表达 | 第41-44页 |
| 2.4.3 一元系统的密度依赖表达特性 | 第44-45页 |
| 2.4.4 细菌密度依赖表达系统QS4的广宿主适应性 | 第45-46页 |
| 2.5 实验讨论及小结 | 第46-48页 |
| 第3章 “阿拉伯糖—细菌密度”二元调控表达系统的构建与功能分析 | 第48-73页 |
| 3.1 引言 | 第48-49页 |
| 3.2 实验材料 | 第49-51页 |
| 3.2.1 药品与试剂 | 第49页 |
| 3.2.2 仪器及技术服务 | 第49页 |
| 3.2.3 菌株、质粒和引物 | 第49页 |
| 3.2.4 培养基以及其他溶液配方 | 第49-51页 |
| 3.2.5 大菱鲆免疫保护力实验场地与材料 | 第51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-57页 |
| 3.3.1 二元调控表达系统的构建 | 第51页 |
| 3.3.2 二元系统在有/无阿拉伯糖环境下表达水平检测 | 第51-52页 |
| 3.3.3 二元系统随细菌密度变化的表达特性检测 | 第52页 |
| 3.3.4 二元系统的宿主适应性分析 | 第52页 |
| 3.3.5 J774巨噬细胞的细菌侵染实验 | 第52-53页 |
| 3.3.6 斑马鱼幼鱼的细菌侵染 | 第53页 |
| 3.3.7 斑马鱼成鱼的腹腔注射与内脏组织蛋白提取 | 第53-54页 |
| 3.3.8 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第54页 |
| 3.3.9 Western blot实验 | 第54-55页 |
| 3.3.10 基于二元调控表达系统的WED多价载体疫苗株的构建 | 第55页 |
| 3.3.11 大菱鲆的饲养 | 第55-56页 |
| 3.3.12 大菱鲆的注射免疫 | 第56页 |
| 3.3.13 大菱鲆的免疫后取样 | 第56页 |
| 3.3.14 大菱鲆的攻毒与相对免疫保护力评价 | 第56-57页 |
| 3.4 实验结果 | 第57-70页 |
| 3.4.1 “阿拉伯糖—细菌密度”二元系统araQS的构建 | 第57-58页 |
| 3.4.2 “阿拉伯糖—细菌密度”二元系统响应阿拉伯糖信号的表达 | 第58-61页 |
| 3.4.3 “阿拉伯糖—细菌密度”二元系统响应细菌密度信号的表达 | 第61-62页 |
| 3.4.4 “阿拉伯糖—细菌密度”二元系统在多种细菌宿主中的表达 | 第62-63页 |
| 3.4.5 “阿拉伯糖—细菌密度”二元系统在J774巨噬细胞中的表达 | 第63-65页 |
| 3.4.6 “阿拉伯糖一细菌密度”二元系统在斑马鱼幼鱼中的表达 | 第65-66页 |
| 3.4.7 “阿拉伯糖—细菌密度”二元系统在斑马鱼成鱼中的表达 | 第66-67页 |
| 3.4.8 基于araQS系统的WED多价载体减毒疫苗株的构建与诱导表达 | 第67-68页 |
| 3.4.9 疫苗株WED(araQS-G)在大菱鲆中的免疫评价 | 第68-70页 |
| 3.5 本章讨论及小结 | 第70-73页 |
| 第4章 “铁—细菌密度”二元调控表达系统的构建与功能分析 | 第73-91页 |
| 4.1 引言 | 第73页 |
| 4.2 实验材料 | 第73-74页 |
| 4.3 实验方法 | 第74-76页 |
| 4.3.1 含有Fur box的启动子的筛选 | 第74-75页 |
| 4.3.2 Fur box筛选质粒的构建 | 第75页 |
| 4.3.3 限铁诱导表达系统体外限铁信号诱导的表达量检测 | 第75-76页 |
| 4.3.4 “铁—细菌密度”二元调控表达系统的密度依赖表达特性检测 | 第76页 |
| 4.3.5 “铁—细菌密度”二元调控表达系统的广宿主特性分析 | 第76页 |
| 4.3.6 “铁—细菌密度”二元调控表达系统的体内表达分析与疫苗效果评价 | 第76页 |
| 4.4 实验结果 | 第76-89页 |
| 4.4.1 Fur box的筛选 | 第76-78页 |
| 4.4.2 “铁一细菌密度”二元调控表达系统的构建与筛选 | 第78-81页 |
| 4.4.3 “铁一细菌密度”二元调控表达系统响应群体密度的表达 | 第81-82页 |
| 4.4.4 “铁—细菌密度”二元调控表达系统在不同细菌宿主中的表达 | 第82-83页 |
| 4.4.5 “铁—细菌密度”二元调控表达系统在J774巨噬细胞中的表达 | 第83页 |
| 4.4.6 “铁—细菌密度”二元调控表达系统在斑马鱼幼鱼中的表达 | 第83-84页 |
| 4.4.7 “铁—细菌密度”二元调控表达系统在斑马鱼成鱼中的表达 | 第84-86页 |
| 4.4.8 基于ironQS系统的WED多价载体减毒疫苗株的构建与诱导表达 | 第86-87页 |
| 4.4.9 疫苗株WED(ironQS-G)在大菱鲆中的免疫保护力 | 第87-89页 |
| 4.5 本章讨论及小结 | 第89-91页 |
| 第5章 群体感应调控的细菌裂解系统的设计 | 第91-99页 |
| 5.1 引言 | 第91页 |
| 5.2 实验材料 | 第91-92页 |
| 5.3 实验方法 | 第92页 |
| 5.4 实验结果 | 第92-97页 |
| 5.4.1 群体感应调控的细菌裂解系统构建 | 第92-93页 |
| 5.4.2 群体感应调控的细菌裂解系统的裂解效果 | 第93-95页 |
| 5.4.3 加入IPTG开关的群体感应裂解系统的构建 | 第95页 |
| 5.4.4 加入IPTG开关的群体感应裂解系统的裂解效果 | 第95-97页 |
| 5.5 本章讨论及小结 | 第97-99页 |
| 第6章 体内限铁信号调控的细菌裂解系统的设计 | 第99-109页 |
| 6.1 引言 | 第99页 |
| 6.2 实验材料 | 第99-100页 |
| 6.3 实验方法 | 第100-102页 |
| 6.3.1 质粒的构建 | 第100页 |
| 6.3.2 限铁培养基中的GFP表达检测 | 第100-101页 |
| 6.3.3 斑马鱼幼鱼中GFP的表达检测 | 第101-102页 |
| 6.3.4 限铁诱导裂解系统的体外检测 | 第102页 |
| 6.3.5 限铁诱导裂解系统的斑马鱼体内检测 | 第102页 |
| 6.3.6 含有裂解系统的鳗弧菌疫苗的生物安全性评价 | 第102页 |
| 6.4 实验结果 | 第102-107页 |
| 6.4.1 限铁调控启动子在鳗弧菌中的筛选 | 第102-103页 |
| 6.4.2 P_(viuA)启动子在斑马鱼体内的表达检测 | 第103-104页 |
| 6.4.3 P_(viuA)启动子调控的裂解系统的构建和筛选 | 第104页 |
| 6.4.4 限铁诱导裂解系统pUTatL2的体内检测 | 第104-105页 |
| 6.4.5 限铁诱导裂解系统在细菌减毒疫苗中的应用 | 第105-107页 |
| 6.5 本章讨论及小结 | 第107-109页 |
| 第7章 总结与展望 | 第109-113页 |
| 7.1 主要结论 | 第109-110页 |
| 7.2 课题创新点 | 第110-111页 |
| 7.3 课题展望 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-120页 |
| 攻读博士学位期间撰写的论文 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 附件 | 第122页 |
