| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-14页 |
| Abstract | 第14-19页 |
| 1 前言 | 第20-32页 |
| 1.1 中枢神经系统是免疫赦免器官 | 第20页 |
| 1.2 CNS存在负向免疫调控作用 | 第20-21页 |
| 1.3 人MS及其动物EAE模型是具有自发缓解特点的CNS自身免疫性疾病 | 第21-25页 |
| 1.3.1 体内存在特异性识别自身髓鞘蛋白的T细胞 | 第21页 |
| 1.3.2 EAE相关的免疫反应的触发 | 第21-23页 |
| 1.3.3 MS的发病过程中CD4~+T细胞起着中枢性作用 | 第23-24页 |
| 1.3.4 MS及EAE模型具有自发缓解的特点 | 第24-25页 |
| 1.4 小胶质细胞是CNS中唯一定居的免疫细胞 | 第25-29页 |
| 1.4.1 CNS小胶质细胞的起源和维持 | 第25-26页 |
| 1.4.2 稳态下的小胶质细胞发挥重要的生理学作用 | 第26-27页 |
| 1.4.3 CNS发生炎症时小胶质细胞的功能复杂 | 第27-29页 |
| 1.5 PD-L1/PD-1作为负性共刺激信号通路参与调节CNS自身免疫性疾病 | 第29-32页 |
| 1.5.1 PD-Ls/PD-1信号通路的生物学功能 | 第29-30页 |
| 1.5.2 PD-L1/PD-1参与调节CNS自身免疫反应 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-42页 |
| 2.1 材料 | 第32-34页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第32页 |
| 2.1.2 试剂和试剂盒 | 第32-33页 |
| 2.1.2.1 一般试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.2.2 抗体及免疫磁珠 | 第33页 |
| 2.1.2.3 试剂盒 | 第33页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.4 溶液及配置 | 第34页 |
| 2.2 方法 | 第34-42页 |
| 2.2.1 EAE模型的诱导 | 第34-36页 |
| 2.2.1.1 C57BL/6小鼠的免疫和神经功能评分 | 第34-35页 |
| 2.2.1.2 组织和冰冻切片 | 第35页 |
| 2.2.1.3 HE染色 | 第35-36页 |
| 2.2.2 常规实验方法 | 第36-37页 |
| 2.2.2.1 小鼠脾脏的单细胞制备 | 第36页 |
| 2.2.2.2 MACS分选细胞步骤 | 第36页 |
| 2.2.2.3 e450荧光染料标记细胞方法 | 第36-37页 |
| 2.2.3 脑和脊髓的单细胞制备 | 第37页 |
| 2.2.4 脑和脊髓小胶质细胞数量的检测 | 第37页 |
| 2.2.5 脑和脊髓小胶质细胞表型的检测 | 第37页 |
| 2.2.6 脑和脊髓Foxp3的检测 | 第37-38页 |
| 2.2.7 脑和脊髓Th1和Th17细胞的检测 | 第38页 |
| 2.2.8 免疫组织荧光间标法(漂洗法)检测腰髓Iba-1的表达 | 第38页 |
| 2.2.9 免疫组织荧光直标法(漂洗法)检测腰髓CD4和PD-1的表达 | 第38页 |
| 2.2.10 小胶质细胞影响抗原肽特异性T细胞增殖的实验 | 第38-39页 |
| 2.2.11 小胶质细胞影响抗原肽特异性T细胞分化的实验 | 第39页 |
| 2.2.12 实时定量PCR检测小胶质细胞一氧化氮合酶的表达情况 | 第39-41页 |
| 2.2.13 培养上清NO的检测 | 第41页 |
| 2.2.14 数据处理与分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-67页 |
| 3.1 MOG_(35-55)诱发的C57BL/6小鼠EAE模型的构建 | 第42-44页 |
| 3.1.1 实验动物发病情况 | 第42-43页 |
| 3.1.2 EAE小鼠脊髓病理切片HE染色 | 第43-44页 |
| 3.2 EAE小鼠模型中小胶质细胞的动态监测 | 第44-49页 |
| 3.2.1 EAE小鼠模型中小胶质细胞数量的变化 | 第44-47页 |
| 3.2.2 EAE模型小鼠CNS中小胶质细胞的表型变化 | 第47-48页 |
| 3.2.3 免疫组织荧光检测小胶质细胞的形态改变 | 第48-49页 |
| 3.3 EAE模型小鼠CNS中CD4~+T细胞的动态监测 | 第49-55页 |
| 3.3.1 流式细胞仪检测EAE模型小鼠CNS中CD4~+T细胞表达PD-1的情况 | 第49-51页 |
| 3.3.2 免疫荧光检测EAE模型小鼠CD4~+T细胞PD-1的表达 | 第51-52页 |
| 3.3.3 流式细胞仪检测EAE模型CNS中CD4~+T细胞亚群的动态变化 | 第52-55页 |
| 3.4 体外共培养体系检测小胶质细胞的免疫抑制作用 | 第55-60页 |
| 3.4.1 小胶质细胞对初始CD4~+T细胞具有抗原提呈作用 | 第55-58页 |
| 3.4.1.1 小胶质细胞具有较弱的抗原提呈能力 | 第55-57页 |
| 3.4.1.2 小胶质细胞诱导初始T细胞分化为Th1 | 第57-58页 |
| 3.4.2 小胶质细胞可抑制脾脏DC诱导的T细胞增殖 | 第58-60页 |
| 3.4.2.1 小胶质细胞抑制DC诱导的T细胞增殖 | 第58-59页 |
| 3.4.2.2 EAE小胶质细胞可抑制DC诱导的Th1的分化 | 第59-60页 |
| 3.5 小胶质细胞通过诱导Treg,释放NO发挥抑制作用 | 第60-62页 |
| 3.5.1 小胶质细胞通过诱导Treg抑制T细胞的增殖 | 第60-61页 |
| 3.5.2 小胶质细胞通过NO抑制T细胞的增殖 | 第61-62页 |
| 3.6 PD-L1对小胶质细胞抑制功能的调控作用 | 第62-67页 |
| 3.6.1 阻断PD-L1使小胶质细胞的抑制作用部分得到逆转 | 第62-63页 |
| 3.6.2 阻断PD-L1可促进Th1细胞的分化 | 第63-64页 |
| 3.6.3 阻断PD-L1不影响Treg的分化 | 第64-65页 |
| 3.6.4 PD-L1通过促进小胶质细胞分泌NO来发挥免疫抑制作用 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-80页 |
| 5 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第95页 |
