摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
第一章 文献综述 | 第14-23页 |
1.1 纤维素酶 | 第14-17页 |
1.1.1 纤维素酶的分类和作用机制 | 第14-15页 |
1.1.2 纤维素酶的应用 | 第15-17页 |
1.2 丝状真菌表达系统 | 第17-20页 |
1.2.1 丝状真菌表达系统的特点 | 第17-18页 |
1.2.2 丝状真菌表达系统的研究现状 | 第18-19页 |
1.2.3 丝状真菌细胞工厂遗传改造的常用策略 | 第19-20页 |
1.3 特异腐质霉 | 第20-22页 |
1.3.1 分类地位 | 第20页 |
1.3.2 特异腐质霉的纤维素酶和半纤维素酶 | 第20-21页 |
1.3.3 特异腐质霉表达系统的研究 | 第21-22页 |
1.4 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
第二章 特异腐质霉高效表达体系的建立 | 第23-44页 |
2.1 引言 | 第23-24页 |
2.2 材料与方法 | 第24-33页 |
2.2.1 菌株和试剂 | 第24-26页 |
2.2.2 培养基 | 第26-28页 |
2.2.3 特异腐质霉基因组DNA的提取 | 第28页 |
2.2.4 质粒构建 | 第28-29页 |
2.2.5 根瘤农杆菌化学感受态细胞的制备 | 第29页 |
2.2.6 质粒转化根瘤农杆菌感受态细胞 | 第29-30页 |
2.2.7 根瘤农杆菌介导的特异腐质霉转化 | 第30-31页 |
2.2.8 随机突变体的构建与筛选 | 第31页 |
2.2.9 突变位点的鉴定 | 第31页 |
2.2.10 摇瓶发酵实验及纤维素酶酶活的测定 | 第31-33页 |
2.3 结果与分析 | 第33-41页 |
2.3.1 抗生素敏感性实验及转化质粒构建 | 第33-34页 |
2.3.2 根瘤农杆菌介导的特异腐质霉转化参数的优化 | 第34-35页 |
2.3.3 转化子的PCR验证 | 第35-36页 |
2.3.4 转化子遗传稳定性的验证 | 第36-37页 |
2.3.5 特异腐质霉转化系统的应用 | 第37-38页 |
2.3.6 特异腐质霉突变体库的构建及纤维素酶高产突变株的鉴定分析 | 第38-41页 |
2.4 讨论 | 第41-44页 |
第三章 特异腐质霉来源新型葡聚糖酶的异源表达 | 第44-66页 |
3.1 引言 | 第44-45页 |
3.2 材料与方法 | 第45-51页 |
3.2.1 菌株和试剂 | 第45页 |
3.2.2 培养基 | 第45-46页 |
3.2.3 特异腐质霉总RNA提取和反转录 | 第46-47页 |
3.2.4 目的基因的克隆及序列分析 | 第47-48页 |
3.2.5 表达载体构建 | 第48页 |
3.2.6 重组蛋白在毕赤酵母细胞中的表达 | 第48-50页 |
3.2.7 重组酶蛋白纯化 | 第50-51页 |
3.2.8 β-葡聚糖酶酶活力的测定 | 第51页 |
3.3 结果与分析 | 第51-64页 |
3.3.1 Hicel6C的基因克隆及序列分析 | 第51-53页 |
3.3.2 HiCel6C在毕赤酵母中的异源表达与纯化 | 第53-54页 |
3.3.3 重组HiCel6C的酶学性质分析 | 第54-57页 |
3.3.4 HiCel6C作用机制研究 | 第57-59页 |
3.3.5 HiCel16A的克隆表达和酶学性质分析 | 第59-64页 |
3.4 讨论 | 第64-66页 |
参考文献 | 第66-74页 |
总结 | 第74-76页 |
博士后期间发表的学术论文和申请的专利 | 第76-77页 |
致谢 | 第77页 |