| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第15-25页 |
| 1.1 棉花黄萎病的概述 | 第15-16页 |
| 1.1.1 大丽轮枝菌概述 | 第15页 |
| 1.1.2 大丽轮枝菌的发病机理 | 第15-16页 |
| 1.2 实验室研究基础 | 第16-17页 |
| 1.3 腺苷酸激酶(AK)研究现状综述 | 第17-21页 |
| 1.3.1 AK概述 | 第17-18页 |
| 1.3.2 AK在维持腺苷酸代谢平衡方面发挥的作用 | 第18页 |
| 1.3.3 AK与维持生物体正常生理活动中的作用 | 第18页 |
| 1.3.4 AK与抗逆之间关系 | 第18-19页 |
| 1.3.5 AK在代谢网络中发挥的调控作用 | 第19-20页 |
| 1.3.6 AK在代谢库积累方面发挥的作用 | 第20页 |
| 1.3.7 AK与真菌致病力之间的关系 | 第20-21页 |
| 1.4 寡糖基转移酶STT3亚基研究现状综述 | 第21-24页 |
| 1.4.1 寡糖基转移酶STT3亚基概述 | 第21页 |
| 1.4.2 STT3与抗逆性之间的关系 | 第21-22页 |
| 1.4.3 STT3与孢子生长发育的关系 | 第22页 |
| 1.4.4 STT3与病原菌分泌蛋白的关系 | 第22-23页 |
| 1.4.5 STT3与上游转录因子之间的调控机理 | 第23-24页 |
| 1.5 技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第25-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 病原菌 | 第25页 |
| 2.1.3 实验菌株和病毒载体 | 第25页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-40页 |
| 2.2.1 本氏烟草农杆菌的注射 | 第26页 |
| 2.2.2 DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 靶标基因同源重组片段的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.4 靶标基因同源重组片段与基因敲除载体pGKO2连接 | 第29-30页 |
| 2.2.5 大肠杆菌DH5a感受态的制备 | 第30页 |
| 2.2.6 大肠杆菌的热激转化 | 第30页 |
| 2.2.7 质粒的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.8 根癌农杆菌电击感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.9 根癌农杆菌的电击转化 | 第32页 |
| 2.2.10 靶标基因(VdAK/VdSTT3)经农杆菌T-DNA介导插入大丽轮枝菌基因组 | 第32-33页 |
| 2.2.11 GFP插入以及回补质粒的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.12 基因敲除突变体的表型及分泌蛋白分析 | 第34页 |
| 2.2.13 总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.14 cDNA单链的合成 | 第35页 |
| 2.2.15 Gateway干扰片段的引物信息 | 第35-36页 |
| 2.2.16 BP反应 | 第36页 |
| 2.2.17 LR反应 | 第36-37页 |
| 2.2.18 农杆菌的活化 | 第37页 |
| 2.2.19 本氏烟草的遗传转化 | 第37页 |
| 2.2.20 大丽轮枝菌孢子的计数方法 | 第37-38页 |
| 2.2.21 本氏烟草的病情指数统计 | 第38页 |
| 2.2.22 真菌生物量的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.23 靶标基因的表达量分析 | 第39-40页 |
| 第三章 腺苷酸激酶(VDAK)基因毒力功能分析 | 第40-52页 |
| 3.1 结果与分析 | 第40-50页 |
| 3.1.1 HIGS初步验证VdAK基因功能 | 第40-41页 |
| 3.1.2 VdAK整合片段的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.3 敲除质粒的构建以及敲除突变体的获得 | 第42-43页 |
| 3.1.4 GFP插入质粒的构建 | 第43页 |
| 3.1.5 回补质粒的构建 | 第43-44页 |
| 3.1.6 逆境条件下菌落形态分析 | 第44-45页 |
| 3.1.7 毒力学分析 | 第45-46页 |
| 3.1.8 相关基因表达量分析 | 第46-47页 |
| 3.1.9 植物转化载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.1.10 本氏烟草的遗传转化 | 第48-49页 |
| 3.1.11 转基因植株的抗病力分析 | 第49-50页 |
| 3.2 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 寡糖基转移酶STT3亚基毒力功能分析 | 第52-61页 |
| 4.1 结果与分析 | 第52-59页 |
| 4.1.0 HIGS初步验证STT3基因功能 | 第52-53页 |
| 4.1.1 STT3基因表达谱分析 | 第53-54页 |
| 4.1.2 STT3突变体的构建 | 第54-55页 |
| 4.1.3 不同碳源条件下菌落形态分析 | 第55-56页 |
| 4.1.4 病原菌蛋白分泌量分析 | 第56页 |
| 4.1.5 毒力学分析 | 第56-57页 |
| 4.1.6 相关基因表达量分析 | 第57-58页 |
| 4.1.7 RNAi阳性植株的获得 | 第58-59页 |
| 4.1.8 转基因植株的抗病力分析 | 第59页 |
| 4.2 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 全文结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简历 | 第72-74页 |
