| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌L-脯氨酸代谢合成 | 第8-11页 |
| 1.1.1 L-脯氨酸简介 | 第8页 |
| 1.1.2 枯草芽孢杆菌简介 | 第8页 |
| 1.1.3 枯草芽孢杆菌渗透压调节因子L-脯氨酸 | 第8-10页 |
| 1.1.4 枯草芽孢杆菌L-脯氨酸延伸途径及其衍生物 | 第10-11页 |
| 1.2 反式4羟脯氨酸概述 | 第11-12页 |
| 1.2.1 反式4羟脯氨酸的性质 | 第11页 |
| 1.2.2 反式4羟脯氨酸的应用 | 第11页 |
| 1.2.3 反式4羟脯氨酸的生物合成 | 第11-12页 |
| 1.3 脯氨酸4羟化酶 | 第12-13页 |
| 1.4 反式4羟脯氨酸生产菌株的育种策略 | 第13-14页 |
| 1.4.1 反式4羟脯氨酸生物合成途径的架构 | 第13页 |
| 1.4.2 反式4羟脯氨酸研究进展 | 第13-14页 |
| 1.5 立题依据及研究意义 | 第14-15页 |
| 1.6 主要研究思路及内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-20页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第16-17页 |
| 2.1.2 引物 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.1.4 工具酶与试剂 | 第18页 |
| 2.1.5 本研究所用培养基 | 第18-19页 |
| 2.1.6 本研究所配置的主要溶液 | 第19-20页 |
| 2.2 重组质粒与重组菌构建的分子实验方法 | 第20-23页 |
| 2.2.1 常规分子操作 | 第20-21页 |
| 2.2.2 枯草芽孢杆菌电转化法 | 第21页 |
| 2.2.3 枯草芽孢杆菌基因敲除 | 第21-22页 |
| 2.2.4 谷氨酰胺合成酶基因glnA敲除质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.3 重组菌生长曲线的测定 | 第23页 |
| 2.4 L-脯氨酸的测定方法 | 第23-24页 |
| 2.4.1 L-脯氨酸标准曲线的绘制 | 第23-24页 |
| 2.4.2 胞外和胞内游离L-脯氨酸的测定 | 第24页 |
| 2.5 重组菌的摇瓶发酵 | 第24-25页 |
| 2.5.1 重组菌L-脯氨酸合成能力探究的摇瓶发酵 | 第24-25页 |
| 2.5.2 产反式4羟脯氨酸重组菌的摇瓶发酵 | 第25页 |
| 2.5.3 产反式4羟脯氨酸重组菌不同盐离子条件下的摇瓶发酵 | 第25页 |
| 2.5.4 产反式4羟脯氨酸基因工程菌摇瓶发酵谷氨酰胺添加量的选择 | 第25页 |
| 2.6 反式4羟脯氨酸含量的测定 | 第25-26页 |
| 2.6.1 反式4羟脯氨酸标准曲线的测定 | 第25-26页 |
| 2.6.2 发酵液中反式4羟脯氨酸浓度的测定 | 第26页 |
| 2.7 发酵液中还原性糖的检测 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-43页 |
| 3.1 枯草芽孢杆菌羟脯氨酸异源合成途径的构建 | 第27-30页 |
| 3.1.1 产反式4羟脯氨酸重组菌的构建 | 第27页 |
| 3.1.2 不同表达载体对反式4羟脯氨酸合成的影响 | 第27-28页 |
| 3.1.3 产反式4羟脯氨酸重组菌的摇瓶发酵 | 第28-30页 |
| 3.2 枯草芽孢杆菌L-脯氨酸合成能力的探究 | 第30-36页 |
| 3.2.1 proB基因和proA基因过表达重组菌的构建 | 第30页 |
| 3.2.2 glnA基因缺失重组菌的构建 | 第30-31页 |
| 3.2.3 glnA基因缺失且过表达proB基因重组菌的构建 | 第31-32页 |
| 3.2.4 glnA基因缺失对重组菌生长的影响 | 第32页 |
| 3.2.5 非胁迫条件对重组菌胞外和胞内游离脯氨酸积累的影响 | 第32-34页 |
| 3.2.6 盐离子胁迫条件对重组菌胞外和胞内游离脯氨酸积累的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.7 枯草芽孢杆菌脯氨酸合成能力探究小结 | 第35-36页 |
| 3.3 L-脯氨酸合成能力对反式4羟脯氨酸合成的影响 | 第36-43页 |
| 3.3.1 盐离子胁迫对反式4羟脯氨酸合成的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.2 产反式4羟脯氨酸基因工程菌的构建 | 第37页 |
| 3.3.3 谷氨酰胺添加量对反式4羟脯氨酸合成的影响 | 第37-39页 |
| 3.3.4 产反式4羟脯氨酸基因工程菌的摇瓶发酵 | 第39-40页 |
| 3.3.5 产反式4羟脯氨酸基因工程菌摇瓶发酵碳源和氮源的初步优化 | 第40-43页 |
| 主要结论与展望 | 第43-45页 |
| 主要结论 | 第43-44页 |
| 展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
