家蚕中一种新的磷酸吡哆醛水解酶的初步研究
| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1. 文献综述 | 第9-14页 |
| 1.1 维生素B6简介其在生物体内作用 | 第9页 |
| 1.2 生物体内维生素B6合成与代谢 | 第9-11页 |
| 1.2.1 维生素B6的合成 | 第9-10页 |
| 1.2.2 哺乳动物体内维生素B6吸收和代谢 | 第10-11页 |
| 1.3 磷酸酶论述 | 第11-14页 |
| 1.3.1 磷酸酶概述和研究进展 | 第11页 |
| 1.3.2 PLP磷酸酶的发现与意义 | 第11-13页 |
| 1.3.3 家蚕磷酸酶研究进展 | 第13-14页 |
| 2. 引言 | 第14-15页 |
| 2.1 研究背景与意义 | 第14页 |
| 2.2 研究内容 | 第14-15页 |
| 3. 材料与方法 | 第15-28页 |
| 3.1 实验材料、主要试剂及设备 | 第15-18页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第15页 |
| 3.1.2 实验设备 | 第15页 |
| 3.1.3 主要试剂及配方 | 第15-18页 |
| 3.2 实验方法 | 第18-28页 |
| 3.2.1 生物信息学分析 | 第18页 |
| 3.2.2 总RNA提取与质量鉴定 | 第18页 |
| 3.2.3 第一链cDNA的合成 | 第18-19页 |
| 3.2.4 BmPLPP基因的克隆和鉴定 | 第19-21页 |
| 3.2.5 原核表达的重组质粒构建 | 第21-24页 |
| 3.2.6 蛋白表达和纯化 | 第24-25页 |
| 3.2.7 蛋白质浓度测定 | 第25-26页 |
| 3.2.8 酶活测定 | 第26页 |
| 3.2.9 酶学性质分析 | 第26-27页 |
| 3.2.10 不同底物催化活性比较 | 第27-28页 |
| 4. 结果与分析 | 第28-39页 |
| 4.1 BmPLPP cDNA序列分析预测 | 第28页 |
| 4.2 RNA检测结果 | 第28页 |
| 4.3 家蚕BmPLPP基因的克隆和测序分析 | 第28-30页 |
| 4.4 BmPLPP基因结构和蛋白功能域分析 | 第30页 |
| 4.5 家蚕BmPLPP的序列分析和同源性比较 | 第30-32页 |
| 4.6 家蚕BmPLPP的原核表达和纯化 | 第32-34页 |
| 4.7 蛋白浓度 | 第34页 |
| 4.8 酶的部分性质研究 | 第34-39页 |
| 4.8.1 最适pH值和pH稳定性 | 第34-35页 |
| 4.8.2 酶促反应的最适温度和温度稳定性 | 第35页 |
| 4.8.3 酶促反应时间 | 第35-36页 |
| 4.8.4 金属离子对酶活性影响 | 第36页 |
| 4.8.5 米氏常数Km | 第36-38页 |
| 4.8.6 对不同磷酸酯底物的催化活性比较 | 第38-39页 |
| 5. 讨论 | 第39-41页 |
| 5.1 家蚕BmPLPP基因序列分析与蛋白分析 | 第39页 |
| 5.2 水解酶的最适pH和最适温度 | 第39-40页 |
| 5.3 金属离子对酶活性的影响 | 第40页 |
| 5.4 Km测定和特异性分析 | 第40-41页 |
| 6. 结论 | 第41-42页 |
| 6.1 BmPLPP基因的克隆、序列分析 | 第41页 |
| 6.2 BmPLPP基因原核表达分析 | 第41页 |
| 6.3 酶学性质 | 第41页 |
| 6.4 酶反应动力学常数测定和底物特异性 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 作者简介 | 第48页 |
