| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-23页 |
| 1 耳聋 | 第12-15页 |
| 1.1 听觉系统的基本结构 | 第12页 |
| 1.2 听觉机制 | 第12-13页 |
| 1.3 耳聋的类型 | 第13-15页 |
| 2 Myh14基因的概述 | 第15-19页 |
| 2.1 Myh14基因的克隆和表达 | 第16页 |
| 2.2 Myh14的基因功能 | 第16页 |
| 2.3 Myh14的结构和定位 | 第16页 |
| 2.4 Myh14与耳聋 | 第16-17页 |
| 2.5 MYH14在耳蜗内的表达 | 第17-19页 |
| 3 CRISPR-Cas9基因编辑技术 | 第19-21页 |
| 3.1 CRISPR-Cas系统的研究历史 | 第19-20页 |
| 3.2 利用CRISPR-Cas9系统进行基因编辑 | 第20-21页 |
| 4 研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 实验材料和方法 | 第23-43页 |
| 1 实验材料 | 第23-28页 |
| 1.1 实验动物 | 第23页 |
| 1.2 细胞 | 第23页 |
| 1.3 质粒和菌株 | 第23页 |
| 1.4 主要试剂 | 第23-25页 |
| 1.5 主要仪器 | 第25-26页 |
| 1.6 PCR引物 | 第26-27页 |
| 1.7 试剂溶液配方 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-43页 |
| 2.1 细胞培养与复苏 | 第28-29页 |
| 2.2 Myh14基因敲除小鼠的构建 | 第29-36页 |
| 2.3 耳蜗蛋白提取以及Western Blot检测 | 第36-37页 |
| 2.4 小鼠耳蜗基底膜铺片染色(整封染色) | 第37-38页 |
| 2.5 小鼠耳蜗石蜡切片和冰冻切片 | 第38-39页 |
| 2.6 苏木精-伊红染色(H&E染色) | 第39-40页 |
| 2.7 切片免疫荧光 | 第40页 |
| 2.8 耳蜗总RNA的提取、反转录以及Real-Time PCR检测 | 第40-41页 |
| 2.9 ABR检查小鼠听力 | 第41-42页 |
| 2.10 小鼠噪声处理 | 第42-43页 |
| 实验结果 | 第43-60页 |
| 1 MYH14在小鼠耳蜗基底膜中的表达 | 第43页 |
| 2 构建Myh14基因敲除型小鼠 | 第43-48页 |
| 2.1 Myh14基因敲除型小鼠的获得和基因型鉴定 | 第43-46页 |
| 2.2 Myh14基因敲除型小鼠中验证MYH14蛋白的表达缺失 | 第46-48页 |
| 3 Myh14基因敲除小鼠形态观察 | 第48-49页 |
| 4 Myh14基因敲除小鼠测听结果 | 第49-50页 |
| 5 Myh14基因敲除小鼠全耳蜗基底膜整封染色以及毛细胞计数 | 第50-51页 |
| 6 Myh14基因敲除小鼠中MYH10蛋白表达上调 | 第51-52页 |
| 7 噪声对MYH14蛋白表达的影响 | 第52-54页 |
| 8 噪声后小鼠听力恢复情况 | 第54-56页 |
| 9 噪声后毛细胞丢失情况 | 第56-58页 |
| 10 噪声后其他蛋白变化 | 第58-60页 |
| 讨论 | 第60-63页 |
| 1 CBA/CaJ品系小鼠是最适合研究噪声性耳聋的小鼠模型 | 第60-61页 |
| 2 Myh10可能互补了Myh14在耳蜗中的缺失 | 第61-62页 |
| 3 丢失Myh14可以促进噪声性耳聋的发生 | 第62-63页 |
| 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 攻读硕士研究生期间发表的主要学术论文情况 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第70页 |
