| 摘要 | 第15-17页 |
| ABSTRACT | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-36页 |
| 1 葡萄糖氧化酶 | 第20-26页 |
| 1.1 葡萄糖氧化酶简介 | 第20-21页 |
| 1.2 葡萄糖氧化酶与葡萄糖脱氢酶的区别 | 第21-22页 |
| 1.3 葡萄糖氧化酶的来源及产酶真菌的鉴定方法 | 第22-24页 |
| 1.3.1 葡萄糖氧化酶的来源 | 第22-23页 |
| 1.3.2 青霉属真菌的分类和鉴定方法 | 第23-24页 |
| 1.4 丝状真菌产葡萄糖氧化酶的发酵工艺研究 | 第24-25页 |
| 1.4.1 培养基组分对产葡萄糖氧化酶的影响 | 第24-25页 |
| 1.4.2 发酵条件对产葡萄糖氧化酶的影响 | 第25页 |
| 1.5 葡萄糖氧化酶的应用 | 第25-26页 |
| 1.5.1 食品和饮料生产 | 第25页 |
| 1.5.2 医药和卫生 | 第25页 |
| 1.5.3 纺织工业 | 第25-26页 |
| 1.5.4 葡萄糖酸、葡萄糖酸盐、乳糖酸的生产 | 第26页 |
| 2 毕赤酵母表达系统 | 第26-29页 |
| 2.1 毕赤酵母表达宿主菌 | 第26-27页 |
| 2.2 毕赤酵母表达载体 | 第27-28页 |
| 2.3 巴斯德毕赤酵母高水平表达策略 | 第28-29页 |
| 2.3.1 提高表达蛋白的稳定性 | 第28-29页 |
| 2.3.2 外源基因的拷贝数 | 第29页 |
| 2.3.3 使用酵母的偏好密码子 | 第29页 |
| 2.3.4 选择适当的蛋白分泌方式 | 第29页 |
| 3 本研究的目的意义和内容 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-36页 |
| 第二章 产葡萄糖氧化酶菌株A4的分离筛选和鉴定及酶学性质研究 | 第36-56页 |
| 1 材料及方法 | 第36-41页 |
| 1.1 材料 | 第36-38页 |
| 1.1.1 分离样品来源 | 第36页 |
| 1.1.2 主要试剂和材料 | 第36-37页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 1.1.4 培养基和主要试剂 | 第37-38页 |
| 1.2 方法 | 第38-41页 |
| 1.2.1 产葡萄糖氧化酶菌株的分离筛选 | 第38-39页 |
| 1.2.2 产葡萄糖氧化酶菌株的鉴定 | 第39-40页 |
| 1.2.3 P.chrysogenum A4葡萄糖氧化酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-52页 |
| 2.1 产葡萄糖氧化酶菌株的分离筛选 | 第41-43页 |
| 2.2 产葡萄糖氧化酶菌株A4的鉴定 | 第43-46页 |
| 2.2.1 产酶真菌A4基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.2.2 产酶真菌A4的分子鉴定 | 第44页 |
| 2.2.3 产酶真菌A4的形态观察 | 第44-46页 |
| 2.3 葡萄糖氧化酶的纯化和酶学性质的研究 | 第46-52页 |
| 2.3.1 P.chrysogenum A4葡萄糖氧化酶的分离纯化和分子量测定 | 第47-48页 |
| 2.3.2 不同底物对P.chrysogenum A4葡萄糖氧化酶活性的影响 | 第48页 |
| 2.3.3 P.chrysogenum A4葡萄糖氧化酶的酶促反应动力学参数测定 | 第48-49页 |
| 2.3.4 温度对P.chrysogenum A4葡萄糖氧化酶活性和稳定性的影响 | 第49-50页 |
| 2.3.5 pH对P.chrysogenum A4葡萄糖氧化酶活性的影响 | 第50-51页 |
| 2.3.6 金属离子和化学试剂对P.chrysogenum A4葡萄糖氧化酶活性的影响 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52页 |
| 4 本章小结 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 第三章 产黄青霉A4产胞外葡萄糖氧化酶发酵工艺条件优化研究 | 第56-72页 |
| 1 材料及方法 | 第56-58页 |
| 1.1 材料 | 第56-57页 |
| 1.1.1 菌种 | 第56页 |
| 1.1.2 主要试剂和材料 | 第56-57页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第57页 |
| 1.1.4 培养基 | 第57页 |
| 1.2 方法 | 第57-58页 |
| 1.2.1 出发菌株的活化 | 第57页 |
| 1.2.2 种子液制备 | 第57页 |
| 1.2.3 发酵培养基成分优化 | 第57-58页 |
| 1.2.4 发酵条件确定 | 第58页 |
| 1.2.5 发酵液粗酶液制备 | 第58页 |
| 1.2.6 酶活力测定 | 第58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-67页 |
| 2.1 培养基成分优化 | 第58-63页 |
| 2.1.1 碳源种类对产酶的影响 | 第58-59页 |
| 2.1.2 葡萄糖浓度对产酶的影响 | 第59-60页 |
| 2.1.3 有机氮源种类对产酶的影响 | 第60页 |
| 2.1.4 麦芽浸粉浓度对产酶的影响 | 第60-61页 |
| 2.1.5 无机氮源种类对产酶的影响 | 第61-62页 |
| 2.1.6 NaNO_3浓度对产酶的影响 | 第62-63页 |
| 2.1.7 培养基组分正交优化实验 | 第63页 |
| 2.2 培养条件的确定 | 第63-67页 |
| 2.2.1 培养温度的确定 | 第63-64页 |
| 2.2.2 接种量的确定 | 第64-65页 |
| 2.2.3 装液量的确定 | 第65页 |
| 2.2.4 发酵时间的确定 | 第65-66页 |
| 2.2.5 发酵动力学曲线 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67页 |
| 4 本章小结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 第四章 产黄青霉A4葡萄糖氧化酶基因在毕赤酵母中的克隆表达 | 第72-100页 |
| 1 材料及方法 | 第72-79页 |
| 1.1 材料 | 第72-73页 |
| 1.1.1 菌种与质粒 | 第72页 |
| 1.1.2 主要试剂及材料 | 第72页 |
| 1.1.3 主要仪器和设备 | 第72页 |
| 1.1.4 培养基和试剂 | 第72-73页 |
| 1.2 方法 | 第73-79页 |
| 1.2.1 Penicillium chrysogenum A4葡萄糖氧化酶基因的克隆与序列分析 | 第73-74页 |
| 1.2.2 葡萄糖氧化酶重组表达载体pPICZαA-GODP的构建 | 第74-77页 |
| 1.2.3 重组表达载体GODP-pPICZαA转化P.pastoris SMD1168 | 第77-78页 |
| 1.2.4 P.chrysogenum A4葡萄糖氧化酶基因在P.pastoris中的表达 | 第78-79页 |
| 1.2.5 重组葡萄糖氧化酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-96页 |
| 2.1 Penicillium chrysogenum A4葡萄糖氧化酶基因的克隆与序列分析 | 第79-84页 |
| 2.1.1 Penicillium chrysogenum A4葡萄糖氧化酶基因的克隆 | 第79页 |
| 2.1.2 Penicillium chrysogenum A4葡萄糖氧化酶与pMD19-T载体的连接 | 第79-80页 |
| 2.1.3 Penicillium chrysogenum A4葡萄糖氧化酶基因序列的分析 | 第80-82页 |
| 2.1.4 Penicillium chrysogenum A4葡萄糖氧化酶三维结构同源模拟及二维结构分析 | 第82-84页 |
| 2.2 葡萄糖氧化酶重组表达载体pPICZαA-GODP的构建 | 第84-90页 |
| 2.2.1 含酶切位点的葡萄糖氧化酶基因的PCR扩增 | 第84-85页 |
| 2.2.2 重组表达载体pPICZαA-GODP的构建和鉴定 | 第85-86页 |
| 2.2.3 重组表达载体GODP-pPICZαA电击转化P.pastoris | 第86-87页 |
| 2.2.4 重组P.pastoris表达葡萄糖氧化酶活力的测定 | 第87页 |
| 2.2.5 重组P.pastoris表达葡萄糖氧化酶发酵条件的研究 | 第87-90页 |
| 2.3 重组葡萄糖氧化酶的纯化和酶学性质的研究 | 第90-96页 |
| 2.3.1 重组葡萄糖氧化酶的分离纯化和分子量测定 | 第90-91页 |
| 2.3.2 不同底物对重组葡萄糖氧化酶活性的影响 | 第91-92页 |
| 2.3.3 重组葡萄糖氧化酶的酶促反应动力学参数测定 | 第92页 |
| 2.3.4 温度对重组葡萄糖氧化酶活性和稳定性的影响 | 第92-94页 |
| 2.3.5 pH对重组葡萄糖氧化酶活性的影响 | 第94页 |
| 2.3.6 金属离子和化学试剂对重组葡萄糖氧化酶活性的影响 | 第94-95页 |
| 2.3.7 重组酶与天然酶的性质比较 | 第95-96页 |
| 3 讨论 | 第96页 |
| 4 本章小结 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-100页 |
| 全文结论 | 第100-102页 |
| 创新点 | 第102-104页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
