| 中文摘要 | 第8-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 1 前言 | 第17-37页 |
| 1.1 GPCR二聚化——“革命性”的新概念 | 第17-18页 |
| 1.2 GPCR最小的功能单位——单体还是二聚体? | 第18页 |
| 1.3 异源二聚体的鉴定标准 | 第18-19页 |
| 1.4 内源性受体之间相互作用的研究方法及策略 | 第19-21页 |
| 1.5 阿片系统与异源聚化系统的交集 | 第21-26页 |
| 1.6 阿片受体参与构成的异源二聚体的功能转归 | 第26-32页 |
| 1.7 阿片受体异源二聚化作用与新药的研发 | 第32页 |
| 1.8 KOR与NTSR1的功能相关性以及发生二聚化的可能性 | 第32-36页 |
| 1.9 本课题主要研究目的和研究内容 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-72页 |
| 2.1 材料 | 第37-44页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第37页 |
| 2.1.2 细胞、质粒及菌株 | 第37页 |
| 2.1.3 主要抗体 | 第37-38页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第38-40页 |
| 2.1.5 主要液体配制 | 第40-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-72页 |
| 2.2.1 SD大鼠纹状体神经元原代培养 | 第44页 |
| 2.2.2 HEK293细胞培养 | 第44-45页 |
| 2.2.3 原代培养的纹状体神经元内KOR与NTSR1表达的鉴定 | 第45-49页 |
| 2.2.4 PLA检测纹状体神经元内KOR与NTSR1之间的相互作用 | 第49-50页 |
| 2.2.5 真核表达载体的构建 | 第50-59页 |
| 2.2.6 HEK293细胞转染 | 第59-61页 |
| 2.2.7 转染HEK293细胞内受体表达的鉴定 | 第61-63页 |
| 2.2.8 免疫共沉淀检测 | 第63-64页 |
| 2.2.9 HEK293细胞内cAMP含量的检测 | 第64-65页 |
| 2.2.10 BRET检测 | 第65-69页 |
| 2.2.11 FRET检测KORs与NTSR1之间的相互作用 | 第69-70页 |
| 2.2.12 PLA检测HEK293细胞内KORs与NTSR1之间的相互作用 | 第70页 |
| 2.2.13 Western blot检测ERK1/2磷酸化 | 第70-71页 |
| 2.2.14 统计学分析 | 第71-72页 |
| 3 结果与分析 | 第72-104页 |
| 3.1 纹状体神经元中KOR及NTSR1的内源性表达及共定位 | 第72-73页 |
| 3.2 纹状体神经元内源性KOR-NTSR1异源二聚体的验证 | 第73-74页 |
| 3.3 重组真核表达载体的构建 | 第74-76页 |
| 3.4 KORs(野生型或突变体)和NTSR1在HEK293细胞中的表达 | 第76-79页 |
| 3.5 KOR及其突变体与NTSR1之间相互作用的检测 | 第79-85页 |
| 3.6 NTSR1与KOR异源二聚化作用对KOR介导的G蛋白信号转导的影响 | 第85-90页 |
| 3.7 KOR-NTSR1异源二聚化作用对KOR募集β-arrestin影响 | 第90-94页 |
| 3.8 KOR-NTSR1异源二聚化作用对KOR介导的ERK1/2磷酸化的影响 | 第94-97页 |
| 3.9 β-arrestin2参与KOR-NTSR1异源二聚体介导的持续性ERK1/2磷酸化 | 第97-99页 |
| 3.10 NTSR1的激活可削弱KOR-NTSR1异源二聚化相互作用 | 第99-102页 |
| 3.11 NT(8-13)对KOR-NTSR1异源二聚体介导的ERK1/2磷酸化的影响 | 第102-104页 |
| 4 讨论 | 第104-116页 |
| 4.1 196位氨基酸是KOR与NTSR1发生异源二聚化结合的关键位点 | 第104-105页 |
| 4.2 异源二聚化结合NTSR1后KOR信号通路的转归 | 第105-108页 |
| 4.3 NTSR1在KOR信号转导通路选择中的独特导向作用 | 第108-111页 |
| 4.4 KOR-NTSR1异源二聚体是否参与疼痛与成瘾的调节? | 第111-113页 |
| 4.5 KOR-NTSR1异源二聚化研究的新方向 | 第113-116页 |
| 5 结论 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第135页 |
