| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| 1.1 植物应答非生物胁迫的调控机理和信号转导 | 第14-17页 |
| 1.1.1 植物对非生物胁迫的感知 | 第14-15页 |
| 1.1.2 植物应答非生物胁迫的转录调控 | 第15-17页 |
| 1.1.3 植物非生物胁迫中功能基因的表达 | 第17页 |
| 1.2 AP2/ERF转录因子在植物非生物胁迫应答中的研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 AP2/ERF转录因子的分子结构和分类 | 第17-19页 |
| 1.2.2 AP2/ERF转录因子基因在植物非生物胁迫中的表达 | 第19-20页 |
| 1.2.3 AP2/ERF转录因子在非生物胁迫中的功能 | 第20-21页 |
| 1.2.4 AP2/ERF转录因子在非生物胁迫中的作用机理 | 第21-22页 |
| 1.3 花生中非生物胁迫相关基因研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 研究背景、研究内容与技术路线 | 第23-26页 |
| 1.4.1 研究背景 | 第23-24页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-43页 |
| 2.1 材料、仪器设备及序列分析软件 | 第26-27页 |
| 2.1.1 花生材料 | 第26页 |
| 2.1.2 拟南芥材料 | 第26页 |
| 2.1.3 质粒和菌株 | 第26页 |
| 2.1.4 工具酶及主要实验试剂 | 第26页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.1.6 引物设计及DNA生物信息学分析软件 | 第27页 |
| 2.1.7 序列分析网站 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-43页 |
| 2.2.1 细菌的培养和菌种的保存 | 第27页 |
| 2.2.2 大肠杆菌热击转化感受态的制备和转化 | 第27-28页 |
| 2.2.3 质粒提取 | 第28-29页 |
| 2.2.4 重组质粒的筛选、鉴定和保存 | 第29页 |
| 2.2.5 DNA电泳 | 第29页 |
| 2.2.6 DNA凝胶回收 | 第29-30页 |
| 2.2.7 农杆菌电击感受态制备和转化 | 第30-31页 |
| 2.2.8 花生总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.9 普通反转录-第一链cDNA的合成 | 第32页 |
| 2.2.10 荧光定量反转录-适合荧光定量PCR的cDNA合成 | 第32-33页 |
| 2.2.11 花生总DNA提取 | 第33页 |
| 2.2.12 AP2/ERF转录因子基因的筛选与克隆 | 第33-34页 |
| 2.2.13 AP2/ERF转录因子基因组织表达和胁迫下的表达分析 | 第34-35页 |
| 2.2.14 酵母AH109感受态的制备及转化 | 第35-38页 |
| 2.2.15 载体构建 | 第38-39页 |
| 2.2.16 根癌农杆菌介导的花生转化 | 第39-40页 |
| 2.2.17 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第40页 |
| 2.2.18 利用农杆菌侵染烟草进行体内瞬时表达 | 第40-41页 |
| 2.2.19 转基因拟南芥的低温与盐胁迫处理 | 第41页 |
| 2.2.20 半定量RT-PCR鉴定AhERF6转基因植株 | 第41-42页 |
| 2.2.21 荧光定量PCR鉴定转基因拟南芥中低温路径Marker-genes的表达 | 第42页 |
| 2.2.22 基因组PCR鉴定转基因花生阳性植株 | 第42-43页 |
| 2.2.23 转基因花生的低温与盐胁迫处理 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-64页 |
| 3.1 花生AP2/ERF转录因子基因的筛选克隆与组织表达分析 | 第43-52页 |
| 3.1.1 花生AP2/ERF家族基因的筛选、克隆及序列分析 | 第43-47页 |
| 3.1.2 6个ERF转录因子基因的表达模式分析 | 第47-52页 |
| 3.1.2.1 组织表达模式分析 | 第47页 |
| 3.1.2.2 低温胁迫下的表达模式分析 | 第47-48页 |
| 3.1.2.3 干旱胁迫下的表达模式分析 | 第48-50页 |
| 3.1.2.4 盐胁迫下的表达模式分析 | 第50-52页 |
| 3.2 AHERF6基因在植物非生物胁迫中的功能与作用机理研究 | 第52-64页 |
| 3.2.1 AhERF6序列分析 | 第52-54页 |
| 3.2.2 AhERF6转录因子转录自激活活性验证 | 第54页 |
| 3.2.3 AhERF6的亚细胞定位 | 第54-55页 |
| 3.2.4 表达载体的构建及遗传转化 | 第55页 |
| 3.2.5 AhERF6在拟南芥中的遗传转化及鉴定 | 第55-58页 |
| 3.2.6 AhERF6基因在拟南芥低温和盐胁迫中的功能及作用机理 | 第58-62页 |
| 3.2.6.1 转AhERF6基因拟南芥在盐胁迫下的抗性 | 第58页 |
| 3.2.6.2 转AhERF6基因拟南芥在低温胁迫下的抗性 | 第58-60页 |
| 3.2.6.3 AhERF6超表达提高转基因拟南芥非生物胁迫抗性作用机理初探 | 第60-62页 |
| 3.2.7 AhERF6在花生中的遗传转化及分子鉴定 | 第62-64页 |
| 3.2.7.1 AhERF6在花生中的转化及T_0代植株分子鉴定 | 第62-63页 |
| 3.2.7.2 转AhERF6基因花生T_2代植株的分子鉴定及表型观察 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-69页 |
| 4.1 花生AP2/ERF转录因子家族序列与其它植物中同源序列有较高的相似性 | 第64-65页 |
| 4.2 6个ERF转录因子基因在非生物胁迫下的表达模式呈现多样性 | 第65-66页 |
| 4.3 在植物中超表达AHERF6能够增强转基因植株对非生物胁迫的抗性 | 第66-67页 |
| 4.4 AHERF6通过调控DREB/CBF路径下游胁迫响应基因的表达发挥作用 | 第67-68页 |
| 4.5 研究展望 | 第68-69页 |
| 4.5.1 AhERF6在花生中的功能研究 | 第68页 |
| 4.5.2 花生其它AP2/ERF家族成员的功能研究 | 第68页 |
| 4.5.3 花生抗逆种质的培育 | 第68-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 攻读学位期间论文及成果情况 | 第87页 |
